黄河裸裂尻鱼肌肉生长抑制素基因克隆及其表达特征研究

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肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)是转化生长因子β(TGF-β)超家族中的一个新成员,对骨骼肌的发育和生长具有负调控作用。MSTN基因的敲除、沉默或抑制表达将引起动物肌细胞增生和肌纤维的肥大,从而增加动物肌肉产量。黄河裸裂尻鱼是裂腹鱼亚科鱼类的代表种,在青藏高原淡水生态系统的食物链中具有重要的地位。但是,同裂腹鱼亚科鱼类一样,黄河裸裂尻鱼固有的生物学特性,如生长期短、生长缓慢、性成熟迟、繁殖力低等,极大地限制了该种群的发展。本研究采用RT-PCR、5’-RACE和3’-RACE法获得黄河裸裂尻鱼MSTN基因全长cDNA序列,并分析了其序列特征;采用半定量RT-PCR和Real-Time PCR检测了MSTN基因的组织表达特异性和胚胎发育阶段的表达特征;同时,构建了肌肉生长抑制素成熟肽序列的原核表达载体并进行表达。主要研究结果如下:1、黄河裸裂尻鱼受精卵在水温8.6~14.5℃,经11天孵化破膜,孵化积温为158.2℃·d。与裂腹鱼亚科的其他鱼类相比较,黄河裸裂尻鱼的胚胎发育相对较慢。2、黄河裸裂尻鱼MSTN基因全长cDNA序列为2180bp,其开放阅读框长1128bp,编码375个氨基酸。5’-端非翻译区长76bp,3’-端非翻译区长976bp,包括3’-端polyA尾和上游加尾信号序列(ATAAA)。在其N末端含有一个22个氨基酸组成的信号肽序列。3、黄河裸裂尻鱼MSTN基因与其他脊椎动物具有相似的基因结构,包括2个内含子和3个外显子。4、黄河裸裂尻鱼MSTN包含两端保守区域:TGF-β前肽区域(41~257bp)和TGF-β功能区域(278~375bp),并具有典型的RXXR蛋白酶水解位点(263~266bp)。5、MSTN基因在黄河裸裂尻鱼9个被检组织中均有表达,但在心、肾、肠、精巢中表达量较高;在胚胎中的相对表达量随胚胎发育阶段的不同而有所差异,暗示MSTN的功能可能并不局限在对肌肉生长发育的负调控作用,可能还有其他功能。6、成功构建了黄河裸裂尻鱼MSTN成熟肽序列原核表达载体(pGEM-4T-1-MSTNm (+)),经BL21原核表达且纯化获得较高纯度的目的蛋白,为后期制备抗体开展MSTN基因的表达调控研究奠定了基础。
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