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神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,具有高致残率、高死亡率的特点。肝癌衍生生长因子(Hepatoma-derived growth factor, HDGF )是自人肝癌细胞株HuH7的条件培养基中分离出的一种酸性肝素结合蛋白。大量研究表明HDGF不仅在肿瘤发生、发展中发挥着极为重要的作用,而且与肿瘤恶性程度及预后高度相关。但目前尚无HDGF与胶质瘤之间关系的报道。目的:(1)明确HDGF与胶质瘤之间是否存在相关性。(2)研究下调HDGF的表达水平对胶质瘤细胞U87体内成瘤能力的影响。(3)采用芯片技术对受HDGF下调影响的基因进行分析,探索分析HDGF影响胶质瘤进展的可能分子机制。方法:(1)通过免疫组化实验结果,比较分析临床不同级别胶质瘤组织中HDGF的表达水平。(2)采用RT-PCR和Western-Blot的方法,比较五株胶质瘤细胞株中HDGF蛋白和mRNA表达水平,并通过细胞芯片免疫组化对结果进一步验证。(3)设计并合成HDGF靶向siRNA,以脂质体为介质瞬时转染入U87细胞,采用RT-PCR及Western-blot检测HDGF基因及蛋白表达水平的变化,判断RNA干扰的效果。(4)采用RNA干扰后的U87细胞建立裸鼠肿瘤种植模型,自成瘤之日起,每2天测量一次肿瘤的大小,并于第15、20和28d分别处死动物,取出肿瘤称重。通过比较肿瘤生长速度、大小等研究RNA干扰HDGF对U87细胞成瘤能力的影响。(5)利用基因芯片技术检测裸鼠种植瘤中受HDGF下调影响的基因,对HDGF作用的可能分子机制进行初步研究。结果:(1)免疫组化证实在胶质瘤肿瘤组织存在HDGF的差异性表达,且表达水平与胶质瘤恶性程度具有相关性。(2)RT-PCR和Western blot及细胞芯片免疫组化结果均证实在五株胶质瘤细胞株中,HDGF存在表达差异,其中U87细胞HDGF表达水平最高。(3)用脂质体瞬时转染siRNA至U87细胞中,RT-PCR及Western-Blot实验结果证实转染48h后,U87细胞中HDGF基因及蛋白表达水平明显下调。(4)动物实验显示,在种植早期,RNA干扰组与未处理组的种植瘤在体积和重量上均有着明显差异,第20d以后差异性逐渐减弱,失去统计学意义。具体数值如下:第15d处死的对照组五只裸鼠平均体积为222.912±85.614mm~3,干扰组为100.840±48.027 mm~3,P值为0.030,肿瘤质量经测量对照组为0.130±0.036g,干扰组为0.062±0.050g,P值为0.040,表现出和体积相同的趋势;第20d处死组对照组平均体积为280.628±74.224 mm~3,干扰组为139.104±39.082 mm~3,P值为0.008,肿瘤质量对照组为0.194±0.053g,干扰组为0.113±0.024g,P值为0.02;第28d处死组肿瘤体积对照组为608.361±224.303 mm~3,干扰组为454.231±297.767 mm~3,P值为0.384,肿瘤质量对照组为0.473±0.057g,干扰组为0.325±0.170g,P值为0.126。(5)基因芯片结果显示RNA干扰HDGF后,U87细胞裸鼠种植瘤中有大量的基因出现表达差异,其中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)表达水平显著下降。结论:(1)在组织及细胞水平上,胶质瘤中存在HDGF的表达差异。(2)采用瞬时转染下调U87细胞HDGF表达水平,在肿瘤生长早期可显著抑制其在裸鼠体内的成瘤能力。(3)基因芯片结果分析提示HDGF可能是通过调节HGF及NF-kB信号途径影响胶质瘤的进展过程。