五灵片是由北五味子和灵芝进行配方组成的保健食品,用于降低酒精性肝损伤的危害。酒精性肝损伤是因长期大量饮酒导致肝组织严重受损,肝细胞结构破坏的疾病。损伤程度与酒精摄入量和酒精摄入时间有关。根据其损伤程度的不同可发展成酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化及肝硬化。目的:考察五灵片中北五味子和灵芝的提取工艺,考察五灵片的制备工艺;以大鼠为模型研究五灵片预防酒精性肝损伤作用并筛选出最佳处方;根据《中国药典》片剂项下的有关规定起草五灵片的质量标准(草案);考察五灵片的初步稳定性;开发五灵片作为酒精性肝损伤保健食品研究提供理论依据。方法:1.五灵片药材的工艺研究:五味子的提取工艺,灵芝粉的制备,工艺条件考察;2.起草质量标准(草案):包括五灵片的处方、制法、性状、含量测定、保健功能、用法用量、贮藏等。3.对酒精性肝损伤保护作用的研究:雄性Wistar大鼠,共200只,体重180~200 g,随机分成两组,12只为正常组,灌胃等体积的蒸馏水,其余188只为模型组,第1~4周灌胃40%白酒8 g/kg,第5~8周灌胃50%白酒9 g/kg,第9~16周灌胃50%白酒10 g/kg。第9周模型组大鼠依据体重随机分为8组,即:模型对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠,五灵片处方一0.25、0.5、1.0 g/kg剂量组,五灵片处方二0.25、0.5、1.0 g/kg剂量组、阳性对照组给予水飞蓟宾0.08 g/kg,各组均灌胃给药,每日1次。给药8周后,腹腔注射水合氯醛0.03 g/kg,麻醉大鼠,腹主动脉取血、取肝脏,检测指标如下:血清中:丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、极低密度脂蛋白(VLDL)、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);肝组织中:甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肝脏指数及肝组织病理学变化。结果:1.五灵片的两种制备工艺(处方一:五味子药材-灵芝药材=1:1。五味子提取物-β-环糊精=1:2,灵芝-淀粉=1:2,粘合剂为10%PVP,润湿剂为50%的乙醇溶液;处方二:五味子药材-灵芝药材=2:1。五味子提取物-β-环糊精=1:2,灵芝-淀粉=1:2,粘合剂为10%PVP,润湿剂为50%的乙醇溶液)均可行。2.五灵片的初步稳定性较好;起草了五灵片的质量标准(草案),可用于五灵片的质量控制。3.五灵片的功效研究:(1)与正常组比较,模型组大鼠血清中AST与ALT活性明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,五灵片处方一高剂量(1.0 g/kg)组能明显降低血清ALT活性(P<0.05),五灵片处方二中、高剂量(0.5 g/kg、1.0 g/kg)组及水飞蓟宾组均能明显降低血清ALT活性(P<0.05或P<0.01);0.5、1.0 g/kg剂量下,五灵片处方二的作用优于五灵片处方一;各组AST活性无影响。(2)与正常组比较,模型组大鼠血清中TC、TG、VLDL、FFA含量均明显升高,肝组织中TC、TG含量明显升高(P<0.05~P<0.001),与模型组比较,五灵片处方一高剂量(1.0 g/kg)组及水飞蓟宾组血清中TC、TG、VLDL、FFA含量均明显降低,肝组织中TC、TG含量明显降低(P<0.05);五灵片处方二中、高剂量(0.5 g/kg、1.0 g/kg)组血清中TC、TG、VLDL、FFA含量均明显降低,肝组织中TC、TG含量明显降低(P<0.05或P<0.01);0.5g/kg剂量下,五灵片处方二的作用优于五灵片处方一。(3)与正常组比较,模型组大鼠血清及肝组织MDA含量均有明显升高,SOD活性明显降低(P<0.05或P<0.01),与模型组比较,五灵片处方一高剂量(1.0 g/kg)组,五灵片处方二中、高剂量(0.5 g/kg、1.0 g/kg)组及水飞蓟宾组均能明显降低大鼠血清及肝组织中MDA含量,升高SOD活性(P<0.05或P<0.01),0.5 g/kg剂量下,五灵片处方二的作用优于五灵片处方一;(4)与正常组比较,模型组大鼠体重明显降低,肝指数明显升高(P<0.01),与模型组比较,五灵片处方一低、中、高剂量(0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg)组,五灵片处方二低、中、高剂量(0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg)组及水飞蓟宾组大鼠体重及肝指数均无明显改善作用;(5)与正常组比较,模型组大鼠肝细胞空泡变性,细胞核皱缩成月牙形,肝窦明显扩张;与模型组比较,五灵片处方一低、中、高剂量(0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg)组,五灵片处方二低、中、高剂量(0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg)组肝细胞病理变化均有所改善,且处方二与处方一无明显差异。结论:1.五灵片的两种制备工艺(五味子药材-灵芝药材=1:1;五味子药材-灵芝药材=2:1)均可行;2.五灵片的制备工艺质量可控,初步稳定性较好;3.五灵片的功效筛选:(1)五灵片可显著降低血清AST及ALT活性,改善肝功能;(2)五灵片可显著减少大鼠血清及肝组织中脂质沉积水平,调节脂类代谢;(3)五灵片能显著降低血清中及肝组织MDA含量,显著升高SOD活性;五灵片可通过减少脂质过氧化,使自由基清除能力增加,增强机体抗氧化能力,减轻肝细胞脂质过氧化损伤,减轻肝细胞坏死程度;(4)处方二的上述作用优于处方一,选用处方二作为降低酒精性肝损伤危害的保健食品,加以开发和利用。