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目的1.研究腺苷酸环化酶相关蛋白1(ade ny la t e cy c lase-a ssoc iated pro tein 1,CAP 1)在肝细胞肝癌(h ep ato ce ll ular ca rcinom a,H CC)中的表达情况,分析CAP1的表达与HCC发生发展及预后的关系。2.研究CAP1在肝细胞肝癌迁移过程的表达变化,初步探讨CA P1在此过程中的作用,旨在进一步加深对H CC转移的分子机制的理解,为其治疗提供新的靶点。方法1.在组织水平,本研究采用west ern blo t技术检测8对H CC及癌旁组织中CAP 1的表达情况;采用实时PCR技术检测CAP1在H CC及癌旁组织中的表达情况;采用免疫组化方法在107例H CC及癌旁组织石蜡切片中检测CAP1的表达情况,并结合H CC临床病理资料分析CAP1与H CC患者的年龄、性别、肿瘤分级、转移以及肿瘤体积等因素之间的相关性,并对其进行随访,应用Kaplan-Me i er法分析H CC患者生存率,以及采用单因素和Cox危险比例模型多因素方法分析CAP1与H CC预后的关系。2.在细胞水平,本研究采用w este rn blo t技术检测正常肝细胞LO2及四种HCC细胞Hu H7,Hep G2,MHCC 97 H,BEL-7 40 4中CAP1的表达情况;采用免疫荧光方法检测MHCC9 7H细胞中CA P1和F-a ct in的共定位情况;干预MHCC 97 H细胞中CAP 1的表达后,采用划痕实验及Tra nswel l实验检测细胞迁移能力。结果1.在组织水平,免疫组化、w est ern blo t及实时PCR分析显示,CAP1蛋白及mRNA在H CC组织中的表达水平高于对应的癌旁组织,且CA P1mRNA在有转移的HCC组织中的表达水平明显高于无转移的HCC组织,CAP 1的表达强度与HCC转移(p=0.0 02)之间具有显著相关性。Kap lan-Me ie r分析表明在HCC中CAP 1的高表达与患者的总生存率降低显著相关(P<0.0 1)。单因素分析显示CA P1和H CC患者的不良预后相关((p=0.00 0)。Cox危险比例模型分析显示CAP1可作为影响HCC预后的独立因素(p=0.01 0)。2.在细胞水平,weste rn blo t分析显示,CA P1在HCC细胞中表达水平高于正常肝细胞LO2中的表达水平,以MH CC 9 7H细胞中的表达最高。免疫荧光分析发现CAP1和F-a ctin在MHCC9 7 H细胞中有共定位。我们发现在MHCC97 H细胞中转染了CAP1的小干扰后,MHCC 9 7 H细胞的迁移能力受到明显抑制。结论1.CAP1在HCC中高表达,并且可作为HCC患者的预后指标,提示CAP 1可能与HCC的发生发展相关。2.在MHCC9 7H的迁移过程中,CAP1的表达是上调的,CAP1能够促进MHCC 9 7 H细胞的迁移,可能是通过改变细胞骨架的重组影响H C C细胞迁移能力的。