利福霉素是在抗结核、麻风和艾滋病病发症中应用广泛的重要抗生素，基因调控策略作为提高利福霉素生物合成的有效方法之一。为此，本论文以利福霉素工业生产菌—地中海拟无枝酸菌为研究对象，探究了基因失活菌株的构建方法，为构建工业高产菌株提供可行性依据。　　由于地中海拟无枝酸菌属于革兰氏阳性菌，外源基因导入比较困难，且外源基因导入率的大小直接影响同源重组的几率，所以本论文首先优化了地中海拟无枝酸菌电击转化条件。以大肠杆菌—拟无枝酸菌穿梭质粒pULVK1-Am为载体，地中海拟无枝酸菌为受体菌，考察了收集菌体时期、细胞壁弱化方式、电击缓冲液和电击参数等因素对转化率的影响。结果表明以0.1μg/mL氨苄青霉素处理细胞，OD600为0.7-0.8时收集菌体，用溶菌酶-LiAc-DTT溶液于37 ℃孵育30 min，去离子水作电击缓冲液，7.5 KV/cm、25μF、750下进行电击，转化率最高可达到9.23×104 CFU/μg质粒DNA。　　由于基因工程改造的工业生产菌株不能带有抗性标记，所以本论文通过重叠延伸PCR技术构建了没有抗性标记的分支酸合酶同源失活载体。用已经优化好的电击转化法将其导入地中海拟无枝酸菌中，经过基因同源重组，得到分支酸合酶失活的菌株。