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海参等水产动物病害频发及抗生素药物滥用,已严重阻碍了水产养殖业的发展。因此,寻找高效、绿色、无残留的微生物制剂来代替抗生素已迫在眉睫。以乳酸菌为代表的益生菌,可以通过改善和维持宿主肠道微生物群落的生态平衡,从而促进宿主机体的健康,所以它们是一种理想的抗生素替代品。本课题的研究的目的是从海参肠道中筛选出有效抑制致病菌的乳酸菌。首先,从大连黄海海域养殖圈中的海参肠道中取样,通过富集培养后,根据菌落形态在MRS和SL培养基中共挑取1397株单菌落,再经过溶钙圈法的初筛,以及模拟肠道环境的耐酸、耐盐和抑菌检测的复筛过程,得到16株对致病菌有明显抑制作用的菌株。进一步比较这16株菌的抑菌活性后选出4株抑菌活性较强且稳定的菌株,分别为HS-R9、HS-R13、HS-R14和HS-R51。进一步利用分子生物学16S rDNA基因序列分析的方法初步鉴定这四个菌株。结果发现,菌株HS-R9为植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum),菌株HS-R13和HS-R14为乳酸片球菌(Pediococcus lolii)和乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),而菌株HS-R51为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。本课题又对菌株HS-R9和HS-R13所产生的活性物质做了进一步研究。首先确定这两株菌在发酵44~48 h时抑菌作用最强,且发酵液具有广谱抑菌活性,尤其是对李斯特氏菌具有显著抗菌作用。然后选取萃取法提取这两株菌发酵上清液中抑菌活性物质,结果表明萃取法效果最佳,并进行抗菌作用的排酸实验、过氧化氢排除实验、蛋白酶敏感实验和Tricine-SDS-PAGE电泳分析,确定了这两株菌所产生的活性物质为抑菌活性的混合蛋白质,且分子量均在14.4kDa以下。进一步对其进行生物学特性分析,结果发现菌株HS-R9和HS-R13所产的活性物质在不同温度、酸碱度条件处理后,均能保持较高活性,初步确定其活性物质为乳酸菌素。本研究为海洋益生菌及海洋生物水产饲用的研究与应用提供了重要的理论依据。