广陈皮等6种栽培型陈皮的品质评价研究

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目的:通过对比研究茶枝柑(广陈皮)与四川大红袍、温州蜜柑、年桔、贡柑及蕉柑等其他5种普通陈皮的性状及显微特征、挥发油成分及相对百分含量、HPLC指纹图谱及橙皮苷等黄酮类成分的含量、多糖含量等方面的差异,构建完整且可靠的质控方法,为陈皮药材质量标准的制定提供不同水平及多个角度的科学依据。方法:1.采用传统中药性状鉴定、显微鉴定等鉴定方法对6种陈皮进行对比研究,找出彼此之间的性状特征及显微特征差异;2.通过水蒸气蒸馏法提取6种陈皮挥发油,利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法进行成分分离及分析鉴定,得到6种陈皮挥发油化学组分及相对百分含量的差异;3.采用C18(5μm,4.6×250mmm)岛津色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,流速1.OmL/min,柱温30℃,检测波长283nm,利用高效液相梯度洗脱方法进行分析,建立广陈皮HPLC指纹图谱并生成共有模式图R,6种陈皮的指纹图谱分别与共有模式图R比对,得到相应的相似度;再用HPLC法对柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷等黄酮类成分进行含量测定;4.采用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)优化超声波辅助提取陈皮多糖工艺,对浸提温度、超声辅助提取时间、液料比三个实验因素进行单因素实验考察,在单因素实验结果的基础上进行3因素3水平的Box-Behnken Design(BBD)设计,再按照响应面设计进行实验,根据实验结果利用相关统计软件得到二次线性拟合方程,预测最佳提取条件,然后验证实际实验结果与理论数学模型的吻合度,最后以此条件提取6种陈皮多糖。成果:1.性状鉴别方面,广陈皮气清香特异,对光透视见油室多、大且密集,与其余陈皮不同;显微鉴别方面,广陈皮的橙皮苷结晶数量及形态与其他陈皮具有差异性。2.挥发油成分分析结果显示,广陈皮中D-柠檬烯含量为6种陈皮中最低,γ-萜品烯最高;药典规定陈皮共有成分有9种,6种陈皮共有成分为5种;广陈皮含特有成分2-(甲氨基)苯甲酸甲酯,温州蜜柑皮含月桂烯,年桔皮含伪柠檬烯。3.建立了广陈皮HPLC指纹图谱并生成共有模式R,广陈皮各批样品相似度均在0.985以上,其余5种陈皮相似度介于0.720~0.873之间,与广陈皮具有一定的差异性;HPLC法测得药典规定陈皮中橙皮苷含量高于其余3种广东常见陈皮,柚皮苷及新橙皮苷含量差异较小。4.陈皮多糖的最佳提取条件为浸提温度4℃、超声辅助提取时间32 min、液料比62:1(v:m,mL·g-1),在该条件下多糖提取率的预测值为15.70%,实际值为15.54±0.26%(n=3),理论值与实际值吻合。结论:本研究表明6种陈皮在上述几个方面均具有一定的差异性,可区分广陈皮与其他5种陈皮,可为陈皮药材质量标准的制定提供不同水平及多个角度的科学依据。建立的广陈皮HPLC指纹图谱可为快速、准确鉴别广陈皮提供依据。通过RSM得到的多糖最优提取工艺稳定可靠,可为后续其他品种陈皮多糖的对比研究提供参考。
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