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细菌性萎蔫病、炭疽病和菌核病是黄瓜上的重要病害,一旦病害发生会严重影响黄瓜产量,造成较大的经济损失。黄萎病、灰霉病和炭疽病是草莓上发病较严重的病害。这些病害的初期症状很相似,难以通过早期症状分析判断出病害类型,给病害诊断和防治造成很大困难。亟需建立快速、准确的诊断方法和检测技术。本研究首先通过石英砂研磨、TENP和PBS洗涤、SDS高盐法裂解和异丙醇沉淀等优化确定了适合农田土壤微生物DNA的提取方法,显著提高了农田土壤中病原菌的检测灵敏度。然后,开展了黄瓜细菌性萎蔫病、炭疽病和菌核病的分子检测研究。采用细菌16SrDNA通用引物对所获得3株代表性黄瓜细菌性萎蔫病菌(Erwinia tracheiphila)进行扩增,建立该病原菌的种系发育树,并设计出引物ET-P1/ET-P2,可扩增出一条794bp的黄瓜细菌性萎蔫病菌特异性条带,灵敏度达到100 fg／μL。通过组合引物ET-P1／ET-P2、CY1／CY2和SSFWD/SSREV,采用正交试验的设计方法,分析研究多重PCR的影响因素,成功筛选并建立了黄瓜细菌性萎蔫病菌(E. tracheiphila)、炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)和菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)的三重PCR检测体系：25μL反应体系中,ET-P1/ET-P2浓度为0.336μmol/L, CY1/CY2浓度为0.24μmol/L, SSFWD/SSREV浓度为0.72μmol/L, Taq聚合酶1U, dNTP浓度为0.15mmol/L, MgCl2浓度为1 mmol/L,63℃退火。灵敏度为10 pg／μL,并实现了田间发病组织和根围土壤中的病害检测。最后,进行了草莓黄萎病、灰霉病和炭疽病的检测研究。对草莓黄萎病菌(Verticillium dahliae kleb.)、棉花及茄子黄萎病菌等的ITS序列进行分析,发现其相似度达99.6%。采用69个随机引物进行该三种宿主来源的大丽轮枝菌RAPD扩增,均未能区分开,该三种宿主来源的大丽轮枝菌可能为同一个病原菌。通过采用正交试验的设计方法,优化多重PCR检测体系,建立了以0.32μmol/L C729+/-,0.032μmol/L DB19/DB22,0.32μmol/L CgInt/ITS4的引物浓度,1.5U Taq聚合酶,0.15 mmol/L dNTP, 1.6 mmol/L MgCl2,最适退火温度为50℃的25μL的三重PCR反应体系,能够快速从田间发病植株和土壤中将草莓灰霉病菌、黄萎病菌和炭疽病菌检测出来,灵敏度可以达到10 pg／μl。两组三重PCR检测体系可用于对田间病害的诊断,为黄瓜和草莓重要病害的早期诊断和监测提供了科学、有效的技术和方法。