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目的:中药清火败毒饮方(Qing Huo Bai Du Yin,QHBDY)灌喂SD-大鼠的血清干预烧伤血清刺激的RAW264.7巨噬细胞,观察其对早期炎症介质肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和晚期炎症介质高迁移率族蛋白1(high mobility group boxchromosomal protein 1,HMGB1)在RAW264.7巨噬细胞中表达的变化情况,以求了解中药QHBDY是否能够抑制TNF-α和HMGB1的释放。
方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,通过SD大鼠正常血清、正常血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物、正常血清+烧伤血清、烧伤血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物干预细胞,采用酶联免疫法检测各组上清液中TNF-α的表达量,免疫印迹技术了解细胞胞浆、胞核及细胞外HMGB1表达的变化情况。
结果:正常血清+烧伤血清干预的RAW264.7巨噬细胞上清液中TNF-α的表达量明显升高,而烧伤血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物组明显低于烧伤组,两者之间有统计学意义(P<0.05),正常血清及正常血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物组上清液中TNF-α表达量极低,与前两者之间有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹技术观察发现:正常RAW264.7巨噬细胞胞浆、胞核中有少量HMGB1表达;正常血清及正常血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物干预后,HMGB1的表达量与正常RAW264.7巨噬细胞HMGB1表达量无统计学意义(P>0.05);烧伤血清干预的RAW264.7巨噬细胞,其细胞浆、细胞核中的HMGB1表达量增加,而烧伤血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物干预组,HMGB1在细胞浆、细胞核的表达量增加,但较烧伤血清干预组低,两组有统计学意义.在正常血清、正常血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物及正常培养基培养的RAW264.7胞外未检测出HMGB1,在正常血清+烧伤血清组和烧伤血清+中药灌喂SD-大鼠血清混合物组的培养基中18小时检测到HMGB1,烧伤组明显高于中药干预组,且呈时间依赖性,烧伤组与中药组有统计学意义(P<0.05)。结论:
烧伤血清能引起RAW264.7释放早期炎性介质TNF-α及晚期炎性介质HMGB1。
中药血清能明显抑制烧伤血清所致的早期炎性介质TNF-α及晚期炎性介质HMGB1的释放。