肌酸激酶同工酶为心肌梗死的重要标志物,目前仍然在临床诊断中发挥重要作用,而以胶体金试纸为代表的简便、快速、可视化且低成本的检测方法,能够满足快速诊断的需求,保证病人得到及时的诊断和治疗。核酸适配体作为一种新型识别分子,具有易于修饰、成本低、化学性质稳定以及配体范围更广等优势,已有研究使用核酸适配体替代传统胶体金试纸中的抗体,这进一步降低的胶体金试纸的成本。目前,研究报道的基于适配体的检测方法多以凝血酶作为检测对象,因为近二十年间,凝血酶的核酸适配体得到了相当充分的研究。但是对于其他蛋白分子,实现基于核酸适配体的检测并不容易,或是没有高亲和力的核酸适配体,或是已有的适配体并不能直接应用于检测方法的建立,需要进一步的优化。因此,本文拟在建立肌酸激酶同工酶核酸适配体筛选方法,且筛选得到具有高特异性和高亲和力的核酸适配体的基础上,研究建立基于核酸适配体的胶体金层析试纸用于肌酸激酶同工酶的快速、可视化检测。本文首先建立了基于SELEX(指数富集的配基系统进化技术)的筛选方法,该方法由甲苯磺酰基磁珠实现肌酸激酶同工酶的固定和分离,使用链霉亲和素磁珠实现单链DNA文库的制备。1-10轮筛选结束后的DNA文库与肌酸激酶同工酶的相对亲和力逐渐升高,表明筛选方法成功建立。应用该方法进行10轮筛选,克隆、测序后得到了10条肌酸激酶同工酶适配体,它们与肌酸激酶同工酶的解离常数在0.81-272 nM之间。表明本研究成功筛选得到了与肌酸激酶同工酶有较强亲和能力的核酸适配体,这组核酸适配体可以作为试纸或其他生物传感器中的生物受体。最后,本文将筛选得到的肌酸激酶同工酶适配体应用于胶体金层析试纸,并对试纸的选材与检测条件进行了优化。最终,成功建立了两种基于适配体的胶体金试纸检测方法,其中适配体-适配体夹心试纸肉眼可检测到82 nM以上的肌酸激酶同工酶;而适配体-抗体夹心试纸肉眼检出的最低浓度可以达到3.27 nM。且该方法对肌酸激酶同工酶具有较好的特异性,牛血清白蛋白、人血清白蛋白、免疫球蛋白G、肌红蛋白和心肌肌钙蛋白均未产生阳性结果。