目的:结直肠癌是我国最常见的消化道系统的恶性肿瘤。近些年发病率及死亡率在各个地区有逐年上升趋势。目前结直肠癌的治疗仍以手术为主,但预后较差,因此急需寻找新的治疗方法。抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)是生物活性肽的一种,在我们既往的研究结果表明,ACBP不仅能有效地抑制多种癌症,并发现ACBP能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖,这为我们寻找结直肠癌的治疗方法提供了新思路。本课题拟深入研究ACBP对结直肠癌细胞作用的分子机制。方法:收集内蒙古医科大学附属医院2018年6月到12月接受结直肠癌根治术的患者对应的正常结直肠组织、及原发性结直肠癌组织各10例。选取结直肠癌细胞系HCT116、RKO、HT29细胞来进行体外研究。采用平板克隆实验及MTT实验研究不同浓度ACBP对结直肠癌细胞克隆形成能力及细胞增殖能力的影响;采用划痕实验和Transwell侵袭实验研究ACBP对结直肠癌细胞的迁移和侵袭的影响。为进一步探讨ACBP抑制结直肠癌细胞增殖的分子机制,我们对ACBP作用后的结直肠癌HCT116细胞进行RNA-Seq以及生物信息学分析,得到差异表达基因谱及通路富集图,分析ACBP作用于结直肠癌细胞系的信号通路。随后我们对Wnt通路的多个靶蛋白进行蛋白质免疫印迹分析,检测不同浓度ACBP对靶蛋白的影响。最后通过检测Wnt通路关键蛋白β-catenin的表达进一步研究ACBP对结直肠癌细胞系发挥作用的位点。实验资料应用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,计量资料采用单因素方差分析,组间比较采用独立样本t检验(Student’st text),P<0.05差异具有统计学意义。结果:ACBP影响结直肠癌细胞的克隆形成能力及细胞增殖能力,并随剂量的增加,抑制作用更明显;ACBP能够抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭作用;ACBP影响磷酸化β-catenin的表达,使其呈剂量依赖性升高,对Wnt通路的多个靶蛋白CycD1、Met、c-myc的表达发挥剂量依赖性抑制作用,提示ACBP抑制结直肠癌细胞增殖的靶点。结论:在本实验中,我们发现ACBP可以抑制结直肠癌细胞系HCT116、RKO、HT29的增殖、迁移及侵袭能力,并随ACBP作用浓度的增加,抑制作用更加明显。我们还发现ACBP是通过Wnt通路对结直肠癌细胞发挥抑制作用。在不同浓度的ACBP作用下,磷酸化β-catenin(P-β-catenin)的表达随ACBP作用浓度的增加,出现明显的剂量依赖性上调。β-catenin磷酸化后被蛋白酶体降解,减少了细胞质中β-catenin的积聚,使进入细胞核中的β-catenin减少,下调下游靶蛋白CycD1、Met、c-myc的表达,这充分的解释了ACBP对结直肠癌细胞增殖的抑制现象。综上所述,我们的实验结果表明ACBP可以通过Wnt/β-catenin信号通路促进β-catenin的降解抑制结直肠癌细胞的增殖。