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目的探讨维生素D辅助治疗对多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）大鼠性激素分泌、胰岛素抵抗、卵母细胞线粒体功能及胚胎发育的影响,并初步探讨PI3K/AKT/m TOR信号通路在其中的作用。方法3周龄雌性SD大鼠随机分为对照组（n=35）和PCOS实验组（模型组）（n=135）,实验组每日灌胃来曲唑（1mg/kg·d）,高脂饲料喂养,对照组灌胃同体积0.5%羧甲纤维素钠（CMC-Na）,普通饲料喂养,连续28d。建模成功后,实验组随机分为未治疗组（PCOS组）、VD组、二甲双胍+达英-35组（M+D,常规治疗组）、VD+二甲双胍+达英-35组（VD+M+D,辅助治疗组）,每组30只。每日上午M+D组和VD+M+D组灌胃二甲双胍（200mg/kg·d）和达英-35（0.2035mg/kg·d）,其余3组灌胃同体积CMC-Na,下午VD组和VD+M+D组灌胃VD3（200IU/kg·d）,其余3组灌胃同体积玉米油,普通饲料喂养。连续治疗21d后取眼内眦血及卵巢,选择性促排卵后取卵母细胞、分离培养颗粒细胞,行下列检测:1阴道细胞学检测动情周期;2石蜡切片、HE染色行卵巢形态学观察,显微镜计数所有卵泡数量;3 ELISA法测定血清25-（OH）D、睾酮（Testosterone,T）、黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）、促卵泡激素（Follicle-stimulating hormone,FSH）、空腹胰岛素（Fasting insulin,FINS）,罗氏血糖仪测空腹血糖（Fasting blood glucose,FPG）;4荧光探针检测卵母细胞线粒体膜电位、活性氧、通透性转换孔及线粒体分布;5透射电镜观察卵母细胞及颗粒细胞线粒体形态、凋亡小体及自噬体;6流式细胞术检测颗粒细胞凋亡;7 western blot检测卵巢组织线粒体融合分裂蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1,自噬相关蛋白LC3、Beclin1、p62,凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-caspase3、Bcl-2、PCNA,信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、p-MTOR、PTEN、p-PTEN表达;免疫组织化学方法检测卵巢组织Bcl-2、Bax、PCNA蛋白表达;8体外培养受精卵,观察胚胎发育情况。结果1 PCOS组大鼠动情周期紊乱,动情间期延长,治疗组大鼠动情周期基本恢复正常;2与PCOS组比较,治疗组大鼠闭锁卵泡和囊性卵泡减少,成熟卵泡和黄体增多,辅助治疗组效果优于VD组及常规治疗组（P（27）0.05）;3治疗组大鼠血清T、LH、FINS水平低于PCOS组（P（27）0.05）,LH/FSH比值及HOMA-IR值均低于PCOS组（P（27）0.05）,辅助治疗组效果优于VD组（P（27）0.05）;4治疗组大鼠膜电位较PCOS组升高（P（27）0.05）,而活性氧水平、通透性转换孔开放程度及线粒体异常率均低于PCOS组（P（27）0.05）;对活性氧及膜电位的治疗效果辅助治疗组优于其余2组（P（27）0.05）;电镜观察显示PCOS组大鼠卵母细胞线粒体肿胀退化,出现空泡,线粒体嵴消失,杆状线粒体减少,球形线粒体增多,治疗组线粒体形态得到改善;5与PCOS组比较,治疗组卵巢组织Drp1蛋白水平降低,Mfn1及Mfn2蛋白水平升高（P（27）0.05）;6与PCOS组比较,治疗组大鼠卵巢组织LC3-II、Beclin1蛋白水平降低,p62蛋白水平升高（P（27）0.05）;电镜结果显示PCOS组大鼠卵母细胞及颗粒细胞中自噬体增多,治疗组自噬体减少;7与PCOS组比较,治疗组卵巢组织Bcl-2、PCNA蛋白水平升高（P（27）0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白水平降低（P（27）0.05）;流式细胞术检测结果显示治疗组颗粒细胞凋亡率低于PCOS组（P（27）0.05）,但仍高于对照组（P（27）0.05）,治疗组之间差异无统计学意义;电镜结果显示PCOS组颗粒细胞体积小,核膜完整,核染色质大部分凝聚,呈数个块状,分散于核质中,细胞器和质膜基本保持完好,治疗组凋亡现象得到明显改善,VD组可见染色质出现轻微边移现象,常规治疗组和辅助治疗组细胞核染色质均匀分布于核质中;8与PCOS组比较,治疗组p-PTEN蛋白水平降低（P（27）0.05）,p-PI3K、p-AKT和p-m TOR蛋白水平升高（P（27）0.05）;9治疗组大鼠获卵数及卵裂率均高于PCOS组（P（27）0.05）,治疗组之间差异无统计学意义;治疗组囊胚率及可移植胚胎率均高于PCOS组（P（29）0.05）,但差异均无统计学意义。结论1 VD辅助治疗可以改善PCOS大鼠性激素紊乱、胰岛素抵抗及卵母细胞线粒体功能障碍;2 VD辅助治疗可以减轻PCOS大鼠卵母细胞和卵泡细胞凋亡和自噬;3 VD辅助治疗可以改善PCOS大鼠胚胎发育质量;4 VD辅助治疗可能通过PI3K/AKT/m TOR信号通路调控PCOS大鼠卵巢细胞的凋亡和自噬。图 28 幅;表 17 个;参 146 篇。