近年来，随着石斑鱼养殖业的不断发展，我国的石斑鱼养殖产量已经接近10万吨。随着养殖规模不断扩大，各种细菌性、病毒性、寄生虫等疾病频发，造成石斑鱼大量死亡，给石斑鱼养殖产业造成严重的经济损失。其中，哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是引起石斑鱼病害中最重要的病原之一。本文利用从患病的美洲黑石斑中分离鉴定得到的哈维氏弧菌 CJG-1 株，对其生长特性以及制备灭活疫苗的最佳条件进行探究，利用哈维氏弧菌感染美洲黑石斑，探讨对美洲黑石斑(Centropristis striata)血清指标和组织中的相关免疫基因表达的影响，以及制备全菌灭活疫苗对美洲黑石斑进行免疫实验，探究对免疫相关基因在不同组织中的免疫应答影响，最后通过人工感染实验检测疫苗对美洲黑石斑的免疫保护效果，主要内容如下：　　（1）对CJG-1哈维氏弧菌进行活化培养，条件180 rpm、28℃进行培养，定时检测菌液浓度，得出哈维氏弧菌CJG-1株的对数增长期为4-12 h；利用活化培养12h的菌液制备全菌灭活疫苗，甲醛浓度设置梯度为0、0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，分别放置在4℃、28℃条件下，灭活24h，经疫苗质量和安全性检测后，得到灭活疫苗最佳条件为甲醛浓度0.2%，28℃，灭活24h。　　（2）对美洲黑石斑腹腔注射0.2ml，1×108 cfu/ml的CJG-1哈维氏弧菌菌液，进行人工感染试验，测定0h（感染前）、6h、12h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h、9 6 h血清中的溶菌酶、碱性磷酸酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶等生化指标，结果显示4种酶活性均不同程度地升高且显著高于对照组，说明美洲黑石斑在受到病菌感染时，机体抗感染的各项指标均增强来抵抗相关的损害因子对机体的伤害。　　（3）人工感染后，在0h（感染前）、6h、12h、18h、24h、36h、48h、72h、9 6 h共 9 个时间点，静脉取血后，快速解剖取脾脏、头肾、肝脏、鳃 4 种组织于装有RNA保存液的离心管中，用于后期RNA提取并反转成cDNA，利用Primer Premier 5.0软件设计TLR2、MyD88、HSP70的特异性引物，以β-action为内参，采用 RT-PCR技术，检测3种基因在4种组织中的相对表达量，结果显示，TLR2和MyD88在脾脏和肝脏中上调倍数最显著，分别为9.3和21倍以及9.9和5.9倍，头肾中的MyD88在6h时迅速上调至峰值2.3倍，鳃中MyD88在36h时上调8.3倍；头肾与鳃中的HSP70反应迅速，在18h上调至最大倍数为11.2和10.7倍，肝脏和脾脏分别在72h时上调至最大倍数9.7和2.8倍，说明TLR2、M yD88、HSP7 0参与了哈维氏弧菌感染的免疫应答，此外也说明，除了头肾和脾脏，肝脏和鳃在免疫应答过程中也是重要的检测评价组织。　　（4）在甲醛浓度为0.2%，28℃条件下，对哈维氏弧菌CJG-1株灭活24h，制得全菌灭活疫苗，对美洲黑石斑腹腔注射0.2ml，1×109cfu/ml的疫苗，在0h（免疫前）、6h、12h、18h、24h、36h、48 h、72 h、96 h共9个时间点，取组织脾脏、头肾、肝脏、鳃保存在RNA保存液中用于后期荧光定量PCR检测TLR2、MyD88、HSP70 相对表达量。2 周后同样剂量和方式加强免疫一次，第 4 周进行用 1 × 108cfu/ml的哈维氏弧菌菌悬液进行攻毒。结果显示得出TLR2和MyD88在头肾和肝脏中上调趋势显著，其中 MyD88 在 36h出现峰值为 73.2 和 95 倍，肝脏中的TLR2在24h上调至最大62.倍，头肾在36h峰值达到144.4倍，HSP70在脾脏、头肾、肝脏、鳃中均在18-48h之内表达量出现峰值，其中头肾在48h上调为对照组的6.2倍，肝脏在18h时上调为对照组的6.6倍；攻毒试验结果显示免疫后的美洲黑石斑获得了较强的免疫保护力，其相对保护率为 85.71%，因此，从分子研究角度对免疫基因表达分析说明TLR2、MyD88、HSP70这3种基因参与到美洲黑石斑免疫应答过程中，良好的免疫保护率也说明疫苗免疫刺激能提高机体的免疫力，本实验制备的灭活疫苗对美洲黑石斑的免疫保护是有效。