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目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)和骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者及健康对照组标本中DNA甲基转移酶3A基因(DNMT3A)基因内差异性甲基化区域2(DMR2)甲基化态势,并统计分析其临床意义。方法应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)技术检测56例AML患者及18例对照组中DNMT3A四种异构体的表达,应用定量甲基化特异性PCR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)技术检测152例AML、82例CML、90例MDS及18例健康对照组中骨髓单个核细胞的DNMT3A DMR2甲基化状态,应用亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,PCR)技术分析DNMT3A DMR2区域的甲基化密度。结果AML、CML和MDS患者较对照组中均存在不同程度的DNMT3A DMR2低甲基化。(1)AML中DNMT3A DMR2甲基化152例AML患者中,84例(55%)为DNMT3A DMR2低甲基化。随机挑选的两例高甲基化患者BSP测序结果示甲基化密度为72.41%和93.97%,两例低甲基化患者甲基化密度为1.72%和3.88%,DNMT3A DMR2高甲基化组的患者甲基化密度高于低甲基化组(随机挑选的两例对照组甲基化密度为60.34%和74.49%)。低甲基化与患者的年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数、FAB分型、WHO分型及染色体核型无关(P>0.05)。DNMT3A DMR2低甲基化与DNMT3A基因、NPM1基因、FLT3基因、IDH1/2基因、C/EBPA基因、C/KIT基因、U2AF1基因以及RAS基因突变均无关(P>0.05)。DNMT3A DMR2高甲基化组与低甲基化组患者经诱导治疗后的完全缓解率(CR)相似(分别为52.5%和48.3%)。DNMT3A DMR2低甲基化患者的总体生存时间(OS)明显短于高甲基化患者(两组患者中位生存时间分别为7个月和11个月,P=0.034)。在非M3患者(两组患者中位生存时间分别为7个月和9个月,P=0.019)和核型正常患者(两组患者中位生存时间分别为7个月和25个月,P=0.011)中,低甲基化患者的总体生存时间同样短于高甲基化患者。多因素分析显示,在核型正常AML患者中,DNMT3A DMR2低甲基化是一个独立的预后不良影响因素。DNMT3A四种异构体的表达均与DNMT3A DMR2的甲基化无相关性。(2)CML中DNMT3A DMR2甲基化82例CML患者中,60例(73%)为DNMT3A DMR2低甲基化,随机挑选的两例高甲基化患者BSP测序结果示甲基化密度为50.34%和37.16%,两例低甲基化患者甲基化密度为2.07%和3.02%。低甲基化与患者的年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数以及核型分组无关(P>0.05)。慢性期、加速期、急变期患者DNMT3A DMR2低甲基化频率分别为72%(46/64)、100%(5/5)、69%(9/13),三组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)MDS中DNMT3A DMR2甲基化90例MDS患者中,64例(71%)为DNMT3A DMR2低甲基化,随机挑选的两例高甲基化患者BSP测序结果示甲基化密度为45.3%和51.7%,两例低甲基化患者甲基化密度为0.49%和1.72%。低甲基化与患者的年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数无关(P>0.05)。低甲基化与患者的WHO分型、核型危险分级以及国际预后评分系统(IPSS)分组无相关性(P>0.05),DNMT3A DMR2低甲基化与DNMT3A基因、IDH1/2基因、U2AF1基因、SF3B1基因突变均无关(P>0.05)。尽管DNMT3A DMR2低甲基化组的生存时间(中位生存时间为20个月)较DNMT3A DMR2高甲基化组(中位生存时间为33个月)为短,但该差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)DNMT3A DMR2低甲基化是造血系统髓系肿瘤AML、CML和MDS患者中的一个常见分子事件;(2)在核型正常AML患者中,DNMT3A DMR2低甲基化是一个独立的预后不良影响因素;(3)DNMT3A DMR2低甲基化与MDS患者预后无关。