泰乐菌素菌种选育及摇瓶发酵条件优化

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泰乐菌素是一种由弗氏链霉菌出现的十六元大环内酯类兽用的高效无存留抑菌促生剂,在国内外有着普遍的市场应用前景,市场需求巨大。目前,在企业生产过程中,存在菌种效价偏低,发酵原材料鱼粉、豆油等价格居高不下,甚至出现生产成本高于销售价格的情况。针对以上问题,本研究利用三重复合诱变的方法对弗氏链霉菌TP116菌株进行诱变处理,获得高产菌株,然后对该抗性突变株的培养条件以及主要发酵培养基原材料的配比进行了优化改良,以充分发挥高产菌株生产能力,提高泰乐菌素的工业发酵水平,降低生产成本,提升产品市场竞争力。本研究得出以下主要结果:(1)通过微波30s及紫外线照射60s和氯化锂复合诱变后,然后以添加泰乐菌素粉抗性筛选结合传统筛选方法,并进行稳定性实验,最终得到菌株TPF116-27,效价达到了10656u/ml,比出发菌株效价提高了14.3%,并以此作为后续的摇瓶发酵实验菌株。(2)通过单因素实验对菌株的培养条件进行优化,最终得到种子培养基的适宜初始pH值为7.0,培养温度为30℃,种龄为46h,装液量为45ml。通过种子培养条件的优化,大大提升了种子的质量,并缩短了种子的培养周期,为后续发酵生产泰乐菌素奠定了基础。(3)通过单因素实验和正交实验确定了泰乐菌素发酵优化后的主要培养基配比:在发酵开始4h补加0.15%的盐酸甜菜碱,12h后添加浓度为0.20%的丙二酸钠,鱼粉2.0%,菜籽油6.0%。通过菌种复合诱变选育得到TPF116-27,并对摇瓶发酵条件进行了优化,使泰乐菌素效价达到11876u/ml,比原始菌株提高了27%。这些研究结果为企业进一步改进和提高泰乐菌素的工业发酵水平,提高生产效率,降低生产成本提供了参考。
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