抗菌肽(APMs)是一种新型的抗生素药物，属于小分子多肽，具有广谱抗菌活性，对真菌，细菌，病毒及癌细胞均有很强的杀伤作用，而且不会引起病原菌的耐药性。可以加快伤口的愈合，提高集体的免疫力，可以作为免疫调节因子，维持机体内环境的稳定与平衡。本实验需要检测的目标基因是Fas/FasL，Fas位于细胞膜表面的跨膜受体，其配体FasL与其结合可以启动细胞凋亡信号的传导，启动细胞凋亡程序。据有关研究发现，Fas/FasL凋亡途径与肿瘤免疫逃逸有关，Fas依赖性细胞凋亡途径是由Fas受体与它的配体FasL的同源性相互作用调节的。正常情况下，活化的T淋巴细胞以外的分泌体产生的FasL与肿瘤细胞表面的死亡受体Fas结合，可以启动肿瘤细胞的程序性死亡。除此之外，Fas/FasL基因还可以充当机体免疫调节因子，当机体受到外来信号刺激时，表达FasL分子的细胞就会与携带Fas抗原的细胞结合，辅助免疫细胞维持机体免疫稳态。本文着重介绍了用不同浓度的抗菌肽处理体外培养的巨噬细胞RAW，以及人工喂养小鼠，然后在细胞水平及动物水平检测目标基因Fas/FasL表达量的变化，来验证抗菌肽对免疫调节的影响。涉及到的实验内容如下：首先进行MTT细胞毒性实验，用不同浓度的抗菌肽处理巨噬细胞RAW以及成正常体细胞纤维细胞3T3，在不同的时间点检测细胞活力值的变化情况，来说明抗菌肽对免疫细胞的影响，然后利用试剂盒提取药物处理过的两种细胞的RNA，经过逆转录，PCR扩增，及实时定量PCR，检测细胞内部Fas/FasL基因各自的变化趋势。其次，提取经过抗菌肽处理过的细胞的总蛋白，对其进行Western blot蛋白水平半定量检测，观察由Fas/FasL编码翻译表达的蛋白量的变化，来进一步验证抗菌肽对基因Fas/FasL的影响。最后，利用流式细胞仪检测从动物组织提取出来的免疫细胞，利用带有不同荧光物质的Fas，FasL抗体与目标蛋白的结合，通过检测荧光强度来说明目标蛋白表达量的变化趋势。基因Fas/FasL表达量及其编码蛋白表达量的变化，来证明抗菌肽对基因Fas/FasL的免疫调节作用。流式细胞检测相对于Western blot更加直观，且更加准确。两者都是用来验证蛋白水平的目标基因表达量变化。经过以上实验验证，细胞水平和蛋白水平的得到的实验结果大体是一致的，抗菌肽对基因FasL有上调作用，能够加快免疫细胞的成熟，说明抗菌肽的免疫调节对机体内环境的稳定是有一定辅助作用的。