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目的:研究褐藻多糖硫酸酯(FPS)对体外培养的人肾间质成纤维细胞(HRIF)增殖的影响,对其分泌纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,以及对HRIF凋亡的影响,以期探讨FPS抗肾间质纤维化的作用机理,为药物的进一步开发提供分子细胞学理论依据。方法:1. HRIF的原代培养与鉴定:取人肾肾乳头组织,切碎后经胰蛋白酶消化,用含15%胎牛血清的DMEM-F12培养液在5%CO2、37℃孵育箱中培养。通过细胞形态、免疫荧光化学检测波形蛋白、α-肌动蛋白、细胞角蛋白和结蛋白等作细胞鉴定。2.台盼兰拒染法进行细胞毒试验检测药物安全性:以不同浓度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育体外培养的HRIF不同时间(24小时、48小时),用不加药物的HRIF作对照。结束培养后,洗脱细胞,台盼兰染色,计算各组活细胞比率。3. MTT法检测细胞增殖:以不同浓度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育体外培养的HRIF不同时间(24小时、48小时),用不加药物的HRIF作对照。结束培养后,采用MTT法检测各组HRIF增殖情况。4. ELISA法分别检测FN、LN、TGF-β1的水平:以不同浓度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育体外培养的HRIF不同时间(24小时、48小时),用不加药物的HRIF作对照。结束培养后各组取细胞培养上清液,用ELISA法分别检测FN、LN、TGF-β1的分泌水平。5.流式细胞仪检测HRIF凋亡情况:以不同浓度的FPS(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)孵育体外培养的HRIF 24小时,