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猪圆环病毒2型(PCV2)可以引起包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)在内的多种疾病。自从1991年在加拿大发现以来,在世界各地都陆续报道本病。目前,虽然商品化PCV2疫苗已经问世并广泛使用,但我国PCV2感染率仍呈逐年上升趋势,并已成为危害我国养猪生产的重要免疫抑制性疫病之一,给养猪业带来巨大的经济损失。主要原因是目前应用的疫苗大多是针对PCV2a型病毒,而目前猪群中主要以PCV2b感染居多,而传统疫苗由于PCV2具有在细胞上繁殖条件特殊,没有明显细胞病变以及繁殖病毒滴度低等缺点,使PCV2传统疫苗生产周期长,成本高,并且免疫效果不理想。因此开发PCV2新型疫苗已成为疫苗研制的主要研究方向。由于核酸疫苗具有免疫原性好,可以诱导机体产生细胞和体液免疫,没有潜在的致病危险和毒力返祖现象,制备工艺简单,生产成本低,便于运输和贮存等优点,已经成为新型疫苗研究的热点。有报道在公猪的精液中检测出PCV2,PCV2可以通过人工受精的方式广泛传播,使得PCV2的预防更加困难。本研究针对PCV2b型病毒构建核酸疫苗,将其ORF2基因克隆到真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-PCV2-ORF2。将该质粒转染BHK-21细胞中,用制备的特异性PCV2多克隆抗体检测到ORF2基因可以在细胞内大量表达,为后期的动物免疫实验奠定了基础。用雄性小鼠作为动物模型,随机分成5组,分别免疫灭菌PBS(PBS组)、空载体pVAX1(空载体组)、真核表达质粒pVAX1-pIL-15(佐剂组)、真核表达质粒pVAX1-PCV2-ORF2(单独免疫组)和联合免疫pVAX1-PCV2-ORF2和pVAX1-pIL-15(联合免疫组)。在免疫过程中利用酶联免疫吸附实验和中和抗体实验,检测疫苗对小鼠体液免疫应答的影响;利用淋巴细胞增殖实验,流式细胞术和双抗体一步夹心ELISA法,检测疫苗对小鼠细胞免疫应答的影响;利用PCV2攻毒保护实验,检测疫苗对小鼠的保护效果,分别从体重变化,小鼠体内PCV2含量,各组织病理变化以及对生殖器官的影响加以评价。实验结果表明,单独免疫组小鼠各项免疫指标均高于PBS组和空载体组小鼠,联合免疫组的免疫效果更显著增强。此外,该核酸疫苗对PCV2攻击具有一定的保护作用,而且也可以保护雄性动物的生殖系统,联合免疫后保护效果更加显著。综上所述,pIL-15作为PCV2核酸疫苗的免疫分子佐剂,不但能增强机体体液和细胞免疫应答水平,还能提高小鼠抵抗PCV2感染的能力。本研究为开发安全有效的PCV2新型疫苗提供一定的理论依据和一个新方向。