PCV2 ORF2基因真核表达质粒的构建及与猪IL-15联合免疫效果研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zhilong217
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪圆环病毒2型(PCV2)可以引起包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)在内的多种疾病。自从1991年在加拿大发现以来,在世界各地都陆续报道本病。目前,虽然商品化PCV2疫苗已经问世并广泛使用,但我国PCV2感染率仍呈逐年上升趋势,并已成为危害我国养猪生产的重要免疫抑制性疫病之一,给养猪业带来巨大的经济损失。主要原因是目前应用的疫苗大多是针对PCV2a型病毒,而目前猪群中主要以PCV2b感染居多,而传统疫苗由于PCV2具有在细胞上繁殖条件特殊,没有明显细胞病变以及繁殖病毒滴度低等缺点,使PCV2传统疫苗生产周期长,成本高,并且免疫效果不理想。因此开发PCV2新型疫苗已成为疫苗研制的主要研究方向。由于核酸疫苗具有免疫原性好,可以诱导机体产生细胞和体液免疫,没有潜在的致病危险和毒力返祖现象,制备工艺简单,生产成本低,便于运输和贮存等优点,已经成为新型疫苗研究的热点。有报道在公猪的精液中检测出PCV2,PCV2可以通过人工受精的方式广泛传播,使得PCV2的预防更加困难。本研究针对PCV2b型病毒构建核酸疫苗,将其ORF2基因克隆到真核表达载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-PCV2-ORF2。将该质粒转染BHK-21细胞中,用制备的特异性PCV2多克隆抗体检测到ORF2基因可以在细胞内大量表达,为后期的动物免疫实验奠定了基础。用雄性小鼠作为动物模型,随机分成5组,分别免疫灭菌PBS(PBS组)、空载体pVAX1(空载体组)、真核表达质粒pVAX1-pIL-15(佐剂组)、真核表达质粒pVAX1-PCV2-ORF2(单独免疫组)和联合免疫pVAX1-PCV2-ORF2和pVAX1-pIL-15(联合免疫组)。在免疫过程中利用酶联免疫吸附实验和中和抗体实验,检测疫苗对小鼠体液免疫应答的影响;利用淋巴细胞增殖实验,流式细胞术和双抗体一步夹心ELISA法,检测疫苗对小鼠细胞免疫应答的影响;利用PCV2攻毒保护实验,检测疫苗对小鼠的保护效果,分别从体重变化,小鼠体内PCV2含量,各组织病理变化以及对生殖器官的影响加以评价。实验结果表明,单独免疫组小鼠各项免疫指标均高于PBS组和空载体组小鼠,联合免疫组的免疫效果更显著增强。此外,该核酸疫苗对PCV2攻击具有一定的保护作用,而且也可以保护雄性动物的生殖系统,联合免疫后保护效果更加显著。综上所述,pIL-15作为PCV2核酸疫苗的免疫分子佐剂,不但能增强机体体液和细胞免疫应答水平,还能提高小鼠抵抗PCV2感染的能力。本研究为开发安全有效的PCV2新型疫苗提供一定的理论依据和一个新方向。
其他文献
唐菖蒲是鸢尾科、菖蒲属球茎类花卉,是商品切花的4大支柱之一.唐菖蒲鲜花在制作花束、花篮和插花、装饰花境中用途颇广.此花原产地中海沿岸及南部非洲地区.目前,我国栽培有数
<正>以2017年6月交通运输部在北京召开"收费公路移动支付技术标准研讨会"为标志,E T C在快速发展的同时,迎来基于车牌识别的无感支付、信用支付、不停车移动支付等新支付手段
类风湿关节炎属自身免疫性疾病,是一种常见的以关节组织慢性炎症性病变为主要表现的全身性疾病,属于中医痹证的范畴。是由于风、寒、湿、热等外邪侵袭人体,闭阻经络,气血运行不畅
中国是水资源贫乏的国家,水已经成为制约国民经济和社会发展的基本因素,水危机已成为摆在我们面前的一个严重问题.水危机的发生,表明人类赖以生存的地球生态环境遭受到了严重
文章在分析带钢热轧时跑偏原因的基础上,对带钢粗轧和精轧等过程中的跑偏提出了相应的控制措施,从而提高带钢轧制过程的稳定性,保证带钢产品质量。
目的了解淮安市尖锐湿疣流行特征,为制定防控政策提供依据。方法收集淮安市2007—2016年性病监测点上报的尖锐湿疣病例数据,应用描述性流行病学方法对数据进行分析。结果 200