胚胎晚期富集(Late embryo genesis abundant,LEA)蛋白是与植物抗逆性密切相关的一类固有无序蛋白。在逆境胁迫下,LEA蛋白可通过保护蛋白质(酶)、脂类、细胞膜结构,结合金属离子等方式维持细胞稳定和生理生化反应的正常进行。根据LEA蛋白的氨基酸保守区域,可将其分为七组,本文研究的大豆PM18蛋白属于第三组LEA蛋白(LEA3)。本实验室前期研究结果证实大豆PM18蛋白的过表达可提高大肠杆菌和拟南芥的抗逆性。PM18基因存在可变剪切,具有两个不同的转录本(PM18A和PM18B),前期我们利用酵母双杂交技术分别对PM18A和PM18B的互作蛋白进行筛选。本文的主要内容是确认PM18A和PM18B的互作蛋白,并分析这些基因在大豆茎、叶组织中的表达差异,进一步推测PM18蛋白在大豆抗逆中的机制。具体结果如下:首先利用全长基因回转酵母验证、Pull-down、BiFC技术验证PM18A、PM18B与候选互作蛋白的相互作用。发现PM18B-9与PM18A/B在体内均存在相互作用,PM18B-4在体外与PM18A/B均存在相互作用,PM18A-1在体外与PM18A存在相互作用。之后,检测了PM18A/B及其候选互作蛋白的亚细胞定位。最后利用qRT-PCR技术研究了PM18及互作蛋白的编码基因在盐胁迫条件下的转录水平。在盐胁迫的大豆叶和茎中,PM18B-9、PM18A和PM18B基因相对表达均上调,并在大豆茎中表现更明显;PM18B-4基因相对表达量在盐胁迫的大豆叶中下调,而在茎中上调,说明PM18B-4在响应胁迫时存在组织差异性。综上所述,本研究鉴定了PM18A/B的互作蛋白,并分析了PM18A/B与互作蛋白参与调控大豆非生物胁迫的分子机制,为进一步阐明大豆抗逆信号通路提供理论基础。