论文部分内容阅读
目的:探究靶向G3BP(GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白)的全新抗癌多肽P162对人食管癌细胞株Eca109是否具有放射增敏作用。通过分析单纯X线照射组与联合P162组中食管癌干细胞比例差异,进一步探讨P162对食管癌细胞系Eca-109的放射增敏机制,及其对食管癌干细胞增殖的影响。方法:1.免疫细胞化学法检测人食管癌细胞株Eca109中G3BP的表达情况。2.采用CCK-8法检测2.5、5、10、20、40μmol/L P162对Eca109细胞增殖抑制率的影响,倒置显微镜观察细胞形态学变化。3.取对数期生长的食管癌Eca109,以0、2.5、5、10μmol/L P162作用48小时后联合X线照射。采用集落形成实验计数各组细胞集落数,计算集落形成率、细胞存活分数,单靶多击模型拟合细胞存活曲线并得到放射生物学参数D0、Dq、SF2。以放射增敏比(SERDq)作为放射敏感性评价指标,SERDq为单纯照射组Dq与照射加药组Dq比值。4.流式细胞仪检测0、2、4、6、8Gy照射剂量下的对照组及联合P162实验组中p75NTR的比例变化。结果:1.免疫细胞化学检测食管癌细胞Eca-109中G3BP的表达结果:镜下观察G3BP蛋白阳性产物主要位于细胞浆,×100倍视野下随机选取计数10个视野,进行免疫细胞化学显色计分,得到分值为1.92±0.346,提示食管癌细胞Eca-109中G3BP高表达。2. P162对食管癌细胞Eca-109增殖的影响:以2.5、5、10、20、40μmol/L P162处理细胞,24小时增殖抑制率:16.19%、21.74%、28.65%、26.73%、29.05%;48小时增殖抑制率:18.93%、29.37%、49.31%、56.31%、61.08%;72小时增殖抑制率:32.53%、42.27%、62.35%、68.43%、67.62%。结果提示:P162对食管癌细胞Eca109增殖有抑制作用,随着P162浓度的增加,Eca-109细胞的增殖抑制作用呈现增加趋势,并且随着P162作用时间的延长,细胞增殖抑制率亦呈现增加趋势。3. P162对Eca109细胞形态学影响:未经P162处理的细胞贴壁,生长良好,圆形或不规则多边形,细胞透亮,如铺路石排列。15μmol/L P162处理24h后,单位面积细胞数量减少,细胞形态逐渐改变,由贴壁逐渐脱落,胞体回缩变圆,体积缩小,形态不规则或呈圆形,随时间延长此类细胞增多。处理48h后细胞较多漂浮,无光泽,内部结构不清楚,胞质内较多颗粒样及空泡状结构。72h后细胞变圆呈球形,体积明显增大,内部结构消失。4. P162对Eca109细胞的放射增敏作用:0、2.5、5、10μmol/L P162作用于Eca109细胞48小时并联合放疗后,各组细胞放射生物学参数:D0值为1.95、1.54、1.64、1.07Gy,Dq值为2.91、1.89、1.24、1.25Gy,N值为4.45、3.40、2.13、3.22,放射增敏比(SERDq)为1.54、2.35、2.33。放疗联合2.5、5、10μmol/L P162处理组的D0、Dq、SF2、SERDq值均低于单纯照射组,提示P162增加了Eca-109细胞对放射的敏感性。5.食管癌干细胞p75NTR细胞的比例分析:当给予0、2、4、6、8Gy的X线照射后,联合P162的实验组中P75NTR的表达比例分别为1.0%、3.5%、11.2%、17.8%、21.1%,对照组中P75NTR的表达比例分别为2.1%、9.0%、17.8%、23.1%、27.4%。对照组中照射剂量与表达p75NTR细胞比例的相关系数r=0.992(P=0.001);实验组中照射剂量与表达p75NTR细胞比例的相关系数r=0.988(P=0.002),提示随着照射剂量的增加,两组p75NTR的百分率逐渐增加;采用配对t检验, t=4.986(P=0.008)两组差异有统计学意义,提示各照射剂量下的实验组与对照组相比,表达p75NTR细胞的含量均有不同程度的减少。结论:1.人食管癌Eca109细胞株高表达G3BP。2. P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用。3. P162对Eca109细胞有放射增敏作用。4. P162能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。5.初步判断P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。