氢醌对HL-60细胞分化以及2-Cys Prxs基因表达的影响

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氢醌(HQ)又名对苯二酚[C6H (0H)],是苯在生物体内主要的中间代谢产物,在苯的血液毒性效应中发挥重要的作用,可导致再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、各型白血病及淋巴瘤等多种造血系统功能障碍,研究HQ的血液毒性机制对探讨苯的毒性机制具有重要的意义。HL-60细胞株是人前髓细胞株,它的髓系祖细胞特性明显,具有多向分化能力,在TPA或DMSO诱导下可分别向单核或粒系分化,适合进行粒系、单核系分化研究。2-Cys Prxs是细胞内一类抗氧化蛋白家族,它们在氧化应激中发挥重要的作用,保护细胞免受氧自由基损害,同时它们在细胞增殖与分化中也起着重要的作用。前期研究发现在人胚肺成纤维细胞MRC-5及人脐血单个核细胞中,HQ的毒性可能与2-Cys Prxs有关。为进一步探讨HQ的血液毒性与2-Cys Prx间的关系,本课题进行如下研究。【目的】研究氢醌(HQ)对TPA、DMSO诱导的HL-60细胞向单核系、粒系分化的影响,并探讨此过程中2-Cys Prxs基因表达的变化。【方法】HL-60细胞培养于IMDM培养液,在37℃,含体积分数为5%CO2的培养箱内培养传代。予不同浓度的HQ+20nmol·L-1 TPA/1.25%DMSO分别处理HL-60细胞,分别于48小时和96小时收集细胞。通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应鉴定细胞分化;CCK-8检测细胞增殖,荧光定量PCR检测2-Cys Prxs基因表达的变化;Western blot检测2-Cys Prxs蛋白表达的变化。【结果】HL-60细胞在TPA/DMSO诱导下可分别向单核系和粒系分化。在1-50μmol·L-1 HQ作用下,HL-60细胞向单核系分化受到抑制;1,5μmol·L-1HQ对DMSO诱导的粒系分化无影响,但50μmol·L-1HQ可抑制细胞向粒系分化。5,50μmol·L-1HQ与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖。与空白对照组比较,TPA和DMSO组2-Cys Prxs基因表达水平均有降低的趋势,不同剂量HQ+20nmol·L-1 TPA组PrxI、PrxIII、PrxⅣ各个基因表达水平与TPA组比较均有增高的趋势;DMSO诱导分化组中仅50μmol·L-1HQ+1.25%DMSO组PrxI、PrxIII两个基因表达水平与单独DMSO组比较显著增高(p<0.01)。【结论】1. TPA/DMSO可以诱导HL-60细胞分化;2. HQ5,50μmol·L-1可以抑制HL-60细胞向单核系分化,50μmol·L-1HQ可抑制细胞向粒系分化;3. 5,50μmol·L-1HQ与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖;4. HQ能够上调PrxI、PrxIII的表达。
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