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目的调查研究宁夏地区绵羊中的BDV的自然感染状况。对阳性检测样本的核苷酸序列进行连接测序,比较分析BDV p24基因序列,建立病毒株的种系发生树,阐明其在宁夏地区绵羊中的自然感染情况及其可能的种系来源;应用转染的OL作进一步的病毒核蛋白的细胞内定位研究,初步探讨病毒的感染和发病机制。方法应用巢式逆转录荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术检测中国宁夏地区绵羊脑组织和PBMC中的BDV p24和p40基因片段;对检测BDV p24和p40基因片段均为阳性标本的p24基因片段进行连接、克隆、测序,并应用EMBL、DNASP4.0和MEGA4.0软件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度,构建Neighbor-Joining基因系统发生树并分析病毒感染的可能来源;对转染的OL应用激光共聚焦显微镜技术和Western blot的方法观察病毒核蛋白在细胞内的表达定位。结果在宁夏地区163只绵羊脑组织和710只绵羊的PBMC中检测到BDV p24和p40阳性基因片段,检出率分别为3.68%(6/163)和1.27%(9/710);对15例阳性检出标本进行连接、克隆、测序,连同14例前期检测序列基因聚合分析显示核酸之间的同源相似度为96.5%～100%,氨基酸的同源相似度为95.3%～100%。与德国马源性标准株He/80同源相似度较高。构建基因的系统发生树发现宁夏的VE患者、抑郁症患者、绵羊和同德国马、绵羊、奥地利马都各自形成了独立的支系,其余阳性检出序列形成混合支系,其中宁夏的VE患者、牛、绵羊同德国的马、日本的绵羊形成了‘德国-中国(宁夏)-日本’的混合支系;在转染BDV p40基因片段的荧光表达质粒的OL内,激光共聚焦显微镜提示核蛋白存在于细胞浆和细胞膜中;Western blot的结果显示在细胞膜蛋白中存在核蛋白,而在细胞浆中未检测到该蛋白。结论中国宁夏地区绵羊中可能存在BDV的自然感染;宁夏地区人和动物BDV的感染存在区域源性BDV独立株和国外传入基因保守株的多源性;在转染的OL内稳定表达了BDV核蛋白,并将其定位在细胞的结构蛋白中,尤其在细胞膜中含量更为丰富,推断其可能在细胞的信号转导或介导病毒感染入胞过程中发挥关键作用。