肌醇六磷酸对人结肠癌细胞系HT-29细胞分化的影响及作用机制的探讨

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目的:不同浓度的IP6作用于人结肠癌细胞系HT-29,观察IP6对癌细胞分化的影响,并对其机制进行探讨。方法:将不同浓度的IP6(对照组,1.8 mM,3.3 mM)作用HT-29细胞不同时间(1d,3d,5d),分别进行如下研究:1、使用透射电镜观察IP6对HT-29细胞超微形态的影响。2、IP6作用3d后,使用流式细胞仪分析各组细胞周期。3、应用RT-PCR法检测IP6对HT-29细胞内c-Myc mRNA表达的影响。4、使用免疫细胞化学法检测IP6对HT-29细胞内Rb、c-Myc蛋白表达的影响。5、测定碱性磷酸酶比活性。结果:1、3.3mM IP6持续作用后,透射电镜下可以观察到细胞结构发生改变,出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势。2、IP6对HT-29细胞细胞周期有明显的阻滞作用,并呈剂量依赖关系。流式细胞仪分析,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞则相应减少。3、RT-PCR和免疫细胞化学实验结果显示,与对照组相比,各浓度IP6均能使细胞内c-Myc mRNA和蛋白的表达减少(P<0.05)。4、免疫细胞化学实验结果表明,IP6能够上调Rb蛋白的表达(P<0.05)。5、IP6作用HT-29细胞后,碱性磷酸酶比活性明显增强。结论:IP6能够促使HT-29细胞向正常细胞转化。IP6可能通过上调Rb蛋白的表达,下调c-Myc蛋白的表达,阻滞细胞周期,诱导细胞分化而发挥其抗肿瘤作用。
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