【摘 要】
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已知蛋白质的翻译后修饰在衰老的调控中扮演着非常重要的角色,但目前已经确定的参与衰老调控的蛋白翻译后修饰酶和相关蛋白仍非常有限。导致这种局限性的一个重要原因,就是目
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已知蛋白质的翻译后修饰在衰老的调控中扮演着非常重要的角色,但目前已经确定的参与衰老调控的蛋白翻译后修饰酶和相关蛋白仍非常有限。导致这种局限性的一个重要原因,就是目前缺少一种研究衰老调控的高通量筛选体系。秀丽线虫因为其生活周期短,是研究衰老的重要模式生物之一。另外,在线虫中已经建立了非常成熟且操作简单的RNAi筛选体系。因此,以秀丽线虫为研究对象,建立一种研究衰老相关基因的高通量筛选体系极为必要。在本论文中,我们将线虫的RNAi筛选体系与96孔板液体培养方法以及寿命检测方法相结合,建立了以96孔板液体培养条件为前提,研究衰老调控基因的高通量RNAi筛选体系。利用该体系以及含有115种蛋白翻译后修饰酶和相关基因dsRNA的RNAi library,我们筛选出与秀丽线虫衰老调控相关的精氨酸甲基转移酶PRMT-6。接下来,我们通过在daf-2、eat-2、clk-1、glp-1突变体线虫中进行prmt-6RNAi实验,发现PRMT-6通过Insulin/IGF-1(ⅡS)信号通路调控线虫衰老,而与能量限制信号通路,线粒体呼吸链/ATP合成体系信号通路,以及生殖腺相关信号通路无关。同时我们也发现PRMT-6在IIS信号通路中调控衰老的过程与SKN-1有关,而与该信号通路中的另一个关键转录因子DAF-16无关。本论文的研究为以秀丽隐杆线虫为模型的衰老相关基因的筛选和研究提供了新的手段和方法。
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