阿特拉津降解菌株的分离和鉴定

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阿特拉津是一种三嗪类除草剂,用于阔叶类杂草的防除,其生物毒性来自于其分子中的一个氯原子.阿特拉津降解途径中第一个酶为阿特拉津氯水解酶(AtzA),其用途是催化阿特拉津水解脱氯,生成无毒的羟基阿特拉津.该研究从河北省宣化农药厂的阿特拉津工业废水中分离出多株阿特拉津降解细菌,对它们的抗菌素抗性、利用碳源和氮源的种类、生长和降解特性等进行了研究,并检查是否含有细菌大质粒,从中选出4株细菌,分别命名为AD3、AD12、AD13和AD25,它们的降解性都大大超过文献报道的假单胞菌ADP,其中AD25菌株利用碳源和氮源的物质广泛,具有较好的应用价值.通过AD3、AD12、AD25菌株的16S rRNA基因的PCR扩增、克隆和核苷酸序列测定,将它们的核苷酸序列与GenBank其它菌株的16S rRNA基因做了同源性比较,结果表明它们均属于节杆菌(Arthrobacter).该文以AD3菌株总DNA为模板,假单胞菌ADP的atzA基因为参考序列,设计PCR引物,通过PCR扩增,得到atzA基因中心区片段,将PCR产物直接测序,通过与假单胞菌ADP的atzA基因中心区片段做同源性比较,证明AD3菌株和ADP菌株的atzA基因中心区有5个核苷酸不同,它们的第455、459、483、545、779位核苷酸,在ADP菌株中分别是C、G、A、T和T,在AD3菌株中分别是T、A、G、A和C.对应的氨基酸序列有4处不同,分别位于AtzA蛋白的74、82、103和181位,在ADP菌株中分别是Arg、Gln、Val和Ser,在AD3菌株中分别是His、Arg、Ile和Pro.这表明AD3菌株的阿特拉津氯水解酶基因是一个不同于节杆菌AD1和假单胞菌ADP的atzA基因的新基因.对富集培养后的降解阿特拉津的混合菌进行长期驯化,用于阿特拉津工业废水的生物修复实验,结果表明,添加营养物质是降解菌株在阿特拉津工业废水中生长所必需的,将物理化学方法和生物法联合使用,可有效去除废水中的阿特拉津,去除率达到82.5﹪.
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