刚果12号桉(Eucalyptus 12ABL)组织培养及多倍体诱导的研究

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nadiazhao
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以刚果12号桉种子的下胚轴为材料,进行组织培养体系的研究,着重研究了具分化潜力的愈伤组织的获得、不定芽的分化、增殖培养、生根培养,建立了从愈伤组织到再生植株的快繁体系;以刚果12号桉的愈伤组织、丛生芽为材料,进行多倍体诱导的研究,通过组织培养与秋水仙碱诱导相结合的方法,着重研究了多倍体诱导材料的选择、秋水仙碱处理的方法以及秋水仙碱处理的最佳浓度和时间的组合,并获得了刚果12号桉多倍体植株。结果表明: (1) 刚果12桉的种子较小、种皮较薄,适用于作用较缓和的H2O2、NaClO消毒剂。 (2) 采用改良H培养基获得较多的有能力分化不定芽的红色紧密型愈伤组织。在外源激素6-BA/NAA合适的配比下,能获得红色紧密型愈伤组织;而培养基中只要添加2,4-D,得到均为没有分化不定芽能力的白色疏松状愈伤组织。诱导培养基中添加椰乳或提高蔗糖的浓度均不起作用。诱导愈伤组织阶段表现最好的配方是改良H培养基+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖40g/L+琼脂粉7g/L。 (3) 愈伤组织15d左右开始分化不定芽,诱导不定芽表现最好的配方是改良H培养基+6-BA1mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖40g/L+琼脂粉7g/L。继代培养三次愈伤组织表面上逐渐形成密集的丛生芽。 (4) 增殖培养中表现最好的配方是MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L,增殖系数达3.4。 (5) 生根效果表现最好的配方是1/2MS+IBA0.5mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂粉7g/L,生根率达100%,平均每株萌发的根系数为3.6条。 (6) 愈伤组织作为多倍体诱导材料,其诱变率高于丛生芽。在以愈伤组织为诱导材料时,浸渍法以处理时间为10h与药液处理浓度为0.75%、处理时间为22小时与药液处理浓度为0.25%的两个组合变异率最高,达到40%;点滴法 刚果12号按(..如如I刀BL)组织培养及多倍体诱导的研究以药液处理浓度为0.25%变异率最高,达到42.9%。在以不定芽为多倍体诱导材料时,混培法以药液浓度为40mg/L处理10d的变异率最高,达到22.5%;点滴法以药液浓度为0.25%的处理变异率最高,达到26.7%。其中浸渍法耗药量最少,变异率也较高,为最佳的处理方法。 (7)多倍体植株与二倍体相比,具有叶片肥厚宽大,叶色浓绿,茎较粗壮等特征;多倍体植株的叶片极显著宽于二倍体,长度差异不显著;多倍体植株的气孔长、宽均极显著大于二倍体,密度较疏。 (8)对已进行形态鉴定的多倍体植株作染色体计数,发现染色体数目均为2n=4x=44,而正常的二倍体植株则为2n二2x=22。本研究还对染色体标本制片技术进行探讨。
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