论文部分内容阅读
基因的正常表达与调控是机体正常生长发育所必需的。组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases, HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDACs)可以通过调节组蛋白或转录因子的乙酰化状态来调节基因的活化或沉默。HATs引发染色质结构的松散,激活转录;而HDACs则可导致染色质集缩,并抑制特定靶基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)能抑制HDACs的活性,并通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导肿瘤细胞生长停滞、分化或凋亡,具有明显的抗肿瘤活性。p21~WAF1/CIP1)基因编码的蛋白是一种细胞周期依赖性蛋白激酶因子(CDKI),在细胞周期调控、细胞凋亡和细胞分化中都起着重要的作用。研究表明,p21~WAF1/CIP1)基因作为一种重要的抑癌基因,其表达量的多少与肿瘤密切相关。p21~WAF1/CIP1)基因的低表达,可造成异常细胞增生,有益于肿瘤的形成。在乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中,p21~WAF1/CIP1)基因的表达明显降低。最近的研究表明,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA、BUA、PB、SAHA、FK-228、MS-275和Oxamflatin等可以诱导p21~WAF1/CIP1)基因表达的增加,而且这种诱导主要发生在转录调节水平上。多金属氧酸盐(Polyoxometallates,简称POMs),是一类前过渡金属氧阴离子簇,以氧阴离子为“桥”,通过自组装过程形成的低聚物。同种无机含氧酸根离子缩合而成的缩合物,称同多酸;不同种无机含氧酸根离子缩合而成的缩合物,称杂多酸。杂多酸种类繁多,结构容易修饰,电学性质多样,所以在医学领域的研究和应用更加广泛。不同的检测技术和实验证明,杂多酸的确是穿过了细胞膜,进入了细胞内。这对于我们的组蛋白去乙酰化酶的筛选工作是有利的。本论文基于p21~WAF1/CIP1)启动子荧光素酶报告基因的药物筛选模型,在近400种杂多酸中筛选出13种具有类组蛋白去乙酰化酶抑制剂活性的化合物。MTT实验显示PA-320对多种肿瘤细胞(HeLa、A549、293T、LNcaP、SW620)的增殖有明显的抑制作用,其IC50(半数致死率)的值在38-70 ug/mL之间。进一步的功能研究发现,PA-320能明显增强p21~WAF1/CIP1)启动子荧光素酶报告基因的活性,并且对HDAC1呈现明显的抑制作用。RT-PCR结果显示,PA-320能显著提高p21~WAF1/CIP1)基因的表达。本实验中以已知的组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA作为对照,PA-320表现了与TSA相同的作用趋势。本研究为应用杂多酸治疗肿瘤提供了理论依据。