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目的:将携有VEGF发卡状核酶(VEGF/Rz)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒(Ad-VEGF/Rz-GFP)感染肺腺癌A549细胞,观察VEGF发卡状核酶对肺腺癌A549细胞生长和VEGF表达的影响。方法:将重组腺病毒在人胚肾QBI-293A(QBI-HEK-293A)细胞中充分扩增后获得病毒液,计算病毒感染效价。以多重感染复数(Multiplicities of Infection MOI)值为100的Ad-VEGF/RZ-GFP感染A549细胞作为实验组,100MOI值的空病毒(Ad-GFP)感染A549细胞作为对照组,设未做干预的A549细胞为空白对照组。RT-PCR法检测实验组中VEGF/Rz在A549中的表达; ELISA法检测感染Ad-VEGF/Rz-GFP后A549细胞上清中VEGF浓度;MTT法观察不同MOI值的Ad-VEGF/Rz-GFP对细胞生长的影响,并对比观察100MOI值Ad-VEGF/RZ-GFP和Ad–GFP对A549细胞生长影响;倒置荧光显微镜(FM)下对比观察A549细胞受Ad-VEGF/RZ-GFP和Ad–GFP感染后的细胞形态学变化;流式细胞技术(FCM)检测48、72小时细胞调亡。结果:(1)携有VEGF发卡状核酶基因的Ad-VEGF/Rz-GFP和Ad-GFP可在QBI-293A细胞充分扩增,扩增后计算病毒效价可达到108pfu/ml,并且能够在A549细胞内进行繁殖。(2)RT-PCR法检测重组腺病毒携带的VEGF/Rz能够在A549细胞中表达(。3)ELISA检测100MOI值Ad-VEGF/Rz-GFP感染的A549细胞上清中VEGF浓度水平下降明显,与A549细胞组和Ad-GFP组相比具有明显差异,而A549细胞组和Ad-GFP组相比则无明显差异。(4)MTT法显示本实验中25、50、100、200MOI值的Ad-VEGF/Rz-GFP都可抑制A549细胞生长,呈浓度和时间积效性,而100MOI值的Ad–GFP对A549细胞生长抑制作用轻微。(5)显微镜下观察感染后细胞形态学变化:实验组A549细胞感染后出现细胞病理性变(Cytopathic Effect,CPE)的数目随MOI值的增大及作用时间的延长逐渐增多,而Ad–GFP组虽然也有细胞CPE变化,但变化不及Ad-VEGF/Rz-GFP组明显;倒置荧光显微镜下观察感染后细胞荧光强度100MOI值Ad-VEGF/Rz-GFP组要明显强于100MOI值Ad–GFP组;流式细胞术(FCM)显示经Ad-VEGF/Rz-GFP组A549细胞调亡率要高于Ad–GFP组,对细胞调亡的影响具有时间依赖性。结论:(1)重组腺病毒Ad-VEGF/Rz-GFP能够感染肺腺癌A549细胞,VEGF/Rz能够在A549细胞中进行表达。(2)Ad-VEGF/Rz-GFP能够抑制A549细胞中VEGF的表达。(3)实验中不同MOI值的Ad-VEGF/Rz-GFP可抑制A549细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强;100MOI值的Ad–GFP对A549细胞生长抑制作用轻微。(4)Ad-VEGF/Rz-GFP能诱导肺腺癌A549细胞凋亡。