氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhengjiaxun2010
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(adipose-derived stemcells,ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①选择3w大的SD大鼠腹股沟脂垫中分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化离心后置于含5ml10%FBS/DMEM的培养基中培养;选择第三代脂肪干细胞接种于6孔板中待细胞融合到80%换成骨诱导液,每3d换液,诱导7d后行茜素红染色。将脂肪干细胞传代到第三代,以1×105/孔接种到6孔板中,细胞融合到80%换成脂诱导液诱导,7d后行油红O染色。②用含0,2.5,5,10,20,40mmol/L浓度氯化锂的培养基分别作用脂肪干细胞24,48,72h后,以MTT法测定氯化锂对细胞增殖的作用。③脂肪干细胞中加入含0,2.5,5,10,20,40mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7d后测定细胞中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)的蛋白活性;④R T-PCR法检测成骨诱导3d后,不同浓度氯化锂作用7d时脂肪干细胞中β-catenin,GSK3β,AKP的表达。结果ADSCs成骨诱导后茜素红染色阳性;成脂诱导后油红O染色阳性;在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5,5,10mmol/L)作用于ADSCs时能促进细胞增殖,高浓度氯化锂(20,40mmol/L)抑制细胞增殖,5mmol/L浓度氯化锂比其他浓度组更能有效促进ADSCs增殖;5mmol/L氯化锂能促进ADSCs的AKP的活性,40mmol/L具有明显抑制活性的作用;同时,氯化锂能上调Wnt/β-catenin信号通路内部组分中β-catenin的基因表达,抑制GSK3β的表达以及促进AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重的影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨向分化,具有剂量依赖性。5mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的最适浓度。
其他文献
目的:通过建立四枚种植体支持的下无牙颌种植覆盖义齿的三维有限元模型,分析Locator及球帽2种连接方式对下颌骨及种植体应力分布的影响,以及骨质对Locator式下无牙颌四枚种植