BDE-99对斑马鱼的发育影响和内分泌干扰作用研究

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PBDEs作为一种溴代阻燃剂,已广泛应用于家具、纺织、建材和电子产品中,它属于持久性有机污染物,对人类健康和环境具有严重危害。五溴联苯醚(2,2’,4,4’,5-pentabromodiphenyl ether, BDE-99)是众多PBDEs的一种,本文以斑马鱼为受试生物,研究了BDE-99对其生殖发育影响和内分泌干扰效应,以评价BDE-99的生态毒性。本研究采用BDE-99经水暴露方式对斑马鱼胚胎/幼鱼发育的影响进行研究,探讨在斑马鱼早期生命阶段,BDE-99对斑马鱼发育影响的剂量-效应关系,结果表明,随着暴露时间的增加,LC50值逐渐减小,96h后LCso不再变化,仅为707μg/L;从24h-48h,每个浓度组的孵化率都发生明显增大,在96h胚胎已全部孵化成小鱼,在暴露初期,以2μg/L浓度组的孵化率为最高;高浓度的BDE-99引起了斑马鱼胚胎发育延迟、发育异常,暴露实验后期引起了幼鱼水肿、脊柱弯曲。根据暴露实验的结果,采取相同的暴露浓度来研究BDE-99对斑马鱼内分泌系统HPA、HPT轴的影响。运用实时定量PCR技术对经BDE-99暴露后的斑马鱼幼鱼/胚胎这三大轴上相关基因的表达调控情况进行研究,判断BDE-99是否通过影响生物信号通路HPA、HPT轴,从而影响受试生物的正常生理功能。结果表明:斑马鱼内分泌轴上的大部分相关基因均受到影响,在HPT轴上,TTR、TRH调控倍数与对照组相比无明显差异,在2μg/L的暴露浓度时,TSHb、TSHR、 TG、TRb、NIS表达量显著性上调,核心基因TRb的表达量显著性上调2.07倍;在HPA轴上,全部基因的调控倍数均是随着暴露浓度的增大而变小,在2μg/L的暴露浓度时,CRH的调控倍数大于2倍,其他基因的调控倍数均不超过2倍。所以,BDE-99对斑马鱼幼鱼的内分泌系统在一定程度上起到了干扰作用。本研究还运用实时定量PCR技术测定了经BDE-99暴露后的斑马鱼幼鱼体内多环芳烃受体(Aryl hydrocarbon receptor, AhR)、过氧化物酶体增殖物活化受体(Peroxisome proliferator activated receptor, PPAR)、孕烷受体(Pregnane x receptor, PxR)、雄激素受体(Androgen receptor, AR)、糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)、盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptor, MR)、甲状腺激素受体(Thyroid hormone reseptor, TR)和雌激素受体(Estrogen receptors, ER)这八大受体以及与它们相关基因的表达情况。结果表明:BDE-99在高浓度(0.5μM)时对八大受体及其相关基因的调控作用与其它两个暴露组相比较为显著,大部分核心基因受到了BDE-99的影响。随着浓度的增加,无显著影响的基因表达量所占比例较小,上下调倍数较大的基因数所占比例逐渐增大,这说明随着暴露时间的延长,胚胎内部蓄积的化合物BDE-99的量越多;BDE-99通过AhR、GR、ERs、PxR等介导内分泌干扰效应。其他受体在本次研究中介导机制不明显,仍需进一步研究探讨。
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