小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)为大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)成员,由土壤中的禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)传播。病毒外壳蛋白是其唯一的结构蛋白,在病毒的侵染过程中扮演多种角色,其携带着与介体和寄主的识别信息,主要功能包装病毒粒子,参与介体传播,病毒与寄主和介体的识别,调节RNA复制,病毒细胞间运动和系统侵染,尤其是对病毒侵染寄主后症状的显现起了决定性作用。由于小麦黄花叶病毒的传播介体抗逆性极强,种植抗病品种为防治此病的唯一有效方法。本文以小麦黄花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)为研究对象,构建酵母双杂交诱饵载体,在小麦酵母双杂交c DNA文库中筛选与之互作的寄主蛋白,并对276个小麦品种进行了田间病圃抗性鉴定。以期为探索小麦黄花叶病毒与小麦互作机制提供理论支持,为小麦黄花叶病毒发生区的品种合理利用提供技术指导。主要研究结果如下:(1)小麦酵母双杂交c DNA文库及p GBK-CP诱饵载体构建本研究以小麦全株为材料,采用Trizol法提取小麦总RNA,参照Fast Track?MAG m RNA Isolation Kit说明书分离纯化后获得的m RNA。反转录合成c DNA后,按照Clone Miner的说明书进行初级文库构建。然后进行LR反应重组到酵母双杂交载体p GADT7-DEST上,转化DH10B感受态细胞,获得酵母双杂交c DNA文库,涂布LB平板鉴定文库质量;扩增WYMV-CP基因,连接到诱饵载体p GBKT7上,并对融合诱饵载体在酵母中的毒性、自激活活性及蛋白表达进行检测。研究结果表明:构建的c DNA文库的滴度为5.86×106 CFU/m L,库容量为2.34×107 CFU,重组率为95.8%,随机选取24个克隆,只有一个插入片段较小,其余都大于1 Kb;诱饵载体在酵母中无毒性和自激活活性,能够表达一个60 k Da大小的融合蛋白。(2)与小麦黄花叶病毒CP互作的寄主因子筛选中量提取文库质粒后转化酵母Y187感受态细胞;构建的WYMV-CP基因诱饵载体,转化Y2H GOLD酵母感受态细胞。将含有小麦c DNA文库的酵母Y187和含有WYMV-CP诱饵载体的Y2H GOLD进行有性杂交,筛选与小麦黄花叶病毒CP互作的寄主因子。通过有性杂交共筛选到29个阳性克隆,通过NCBI比对发现,25个克隆读码框正确,其中4个克隆为磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)基因片段,1个克隆为苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)基因片段,1个克隆为叶绿体依赖ATP的FTSH 2蛋白酶(ATP-dependent zinc metalloprotease FTSH 2,chloroplastic)基因片段,3个克隆为Ta ENO-b烯醇激酶(isolate Ta ENO-b enolase)基因片段,其余为未知功能的小麦基因片段。(3)小麦品种对小麦黄花叶病毒的抗性鉴定2013-2015年利用分级评价方法对276个小麦品种进行了田间病圃抗病鉴定。三年调查结果表明,在供试小麦品种中,免疫品种占所有种植品种的比例最大,2013-2015分别占比63.77%、74.64%、66.67%;抗性品种所占比例最小,3年分别占比3.62%、2.54%、4.71%;3年中中抗品种分别占比18.12%、18.12%、25.72%;感病品种分别占比14.49%、4.71%、2.90%。其中阜麦936、淮麦18、连麦2号等100个小麦品种三年统计结果相同,都表现为免疫。研究结果为指导小麦黄花叶病区合理选择小麦品种提供了科学依据。