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本文依据微生物培养基选择和配制的工业发酵生产原则,对BacillussubtilisB1⑥菌株工业化产多糖发酵条件做了系统研究。通过单因素实验、正交实验以及不同发酵条件实验对BacillussubtilisB1⑥产多糖量进行比较,发现在微生物生长发育过程和生物合成过程中,培养基中碳氮的比例(C/N)在发酵工业中非常重要,同时还需要添加大量元素和微量元素,如镁、硫、磷、钾、锰等来促进微生物的生长。结果表明:BacillussubtilisB1⑥菌株工业化产多糖发酵过程中,培养基组成对多糖发酵有重要影响;实验确定了该菌株多糖发酵的最佳培养基配方及发酵条件。
从发酵液中提取BacillussubtilisB1⑥胞外多糖,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳和纤维素阴离子交换色谱发现:多糖纯度较高。用纸层析和GC对多糖进行组分分析,结果表明:含量较高的组分为葡萄糖和阿拉伯糖。GC结果还表明:多糖具有标样中出现的7种单糖成份鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、岩藻糖,但由于含量较少,纸层析只有两个显色斑,无法显色其他成分。说明多糖可能由一种高含量的葡萄糖、阿拉伯糖和其他成分组成。
在BacillussubtilisB1⑥胞外多糖功能活性研究方面,通过小鼠游泳实验,发现该菌胞外多糖对抗疲劳能力有一定增强作用;其次,多糖浓度为100μg/ml的溶液能够有效地抑制肿瘤细胞生长,引起其凋亡;通过抗肿瘤实验进一步验证:该菌胞外多糖具有一定的抗肿瘤能力。