抗体是能与抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。作为一类关键试剂,其在临床诊断、治疗以及基础研究中均发挥了重大作用。常规抗体制备需要较长的时间和复杂的动物免疫过程。基于体外展示文库和淘选的抗体制备技术虽然可以省去动物免疫过程,但现有的流程一般一次只能制备一种或有限的几种抗体。在组学研究中往往需要对特定物种的蛋白质组进行全局性的研究,需要大量特异性的抗体。因此我们迫切地需要发展一种快速、高通量的通用抗体制备技术。在本研究中我们将高通量蛋白质芯片技术同纳米抗体噬菌体展示文库相结合,尝试利用蛋白质芯片上固定的大量蛋白来进行特异性抗体的富集淘选。纳米抗体是一类新型的小分子抗体,分离自骆驼的重链抗体,相较于传统抗体具有很多独特的性质,如尺寸小、可溶性好以及稳定性强等。在本研究中我们以发展新型抗体制备技术为目标,首先对已有的纳米抗体库进行了测序验证,评估了抗体库的质量,结果表明抗体库有着多样性较好,为7×108。同时我们将蛋白质组芯片技术同噬菌体展示技术结合,利用结核分枝杆菌全蛋白质组芯片对抗体库进行了5轮淘选。芯片扫描结果显示,在经过3轮淘选后,不同靶蛋白的高亲和力抗体得到了有效的富集。为了高效地获取芯片上每个蛋白点所结合的纳米抗体,我们对不同的芯片基片进行了测试,基于回收的效率,我们最终选定了 PET-GMA(Polyethylene terephthalate-Glycidyl methacrylate)基片上,进行化学修饰后,在其上固定蛋白质并进行了淘选。随后采用LCM(Laser capture microdissection)的方法,优化了定位,洗脱等步骤,初步建立了一套高效的芯片蛋白点回收技术。在此基础上,我们获得了一套针对结核分枝杆菌所有蛋白质的纳米抗体库,在该库中,针对每一种蛋白质的纳米抗体单独存放。本研究初步建立了基于蛋白质组芯片的全局性纳米抗体筛选技术。相信经过进一步的验证和优化,我们将能为生命科学研究提供一套全新的工具。