【摘 要】
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本课题基于透明质酸(HA)和聚乙烯亚胺(PEI)的优良特性,成功合成聚乙二醇单甲醚接枝透明质酸(mPEG-g-HA)和维生素E接枝聚乙烯亚胺(VES-g-PEI)。以mPEG-g-HA和VES-g-PEI为载体
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本课题基于透明质酸(HA)和聚乙烯亚胺(PEI)的优良特性,成功合成聚乙二醇单甲醚接枝透明质酸(mPEG-g-HA)和维生素E接枝聚乙烯亚胺(VES-g-PEI)。以mPEG-g-HA和VES-g-PEI为载体材料,选用卵清蛋白(OVA)为模型药物,制备了OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI纳米胶束。考察包载OVA纳米胶束的理化性质及其抗肿瘤效果,为该载药纳米胶束用于抗肿瘤治疗的进一步研究与开发提供了理论依据。采用EDC缩合法合成VES-g-PEI和mPEG-g-HA,通过1HNMR,IR手段进行材料结构表征,采用核磁法测定mPEG-g-HA的mPEG取代度为11.7%,采用元素分析法测定VES-g-PEI的VES取代度为3.2%,5.8%,9.3%通过芘荧光法测定载体临界胶束浓度,VES取代度为3.2%,5.8%,9.3%的VES-g-PEI的临界胶束浓度分别为102.3,20.7,15.6 μg/mL。采用超声自组装法制备OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI纳米胶束。OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI纳米胶束粒径为132.1 nm,表面电荷为-35.1 mV,载药率13.6%。OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束的透射电镜结果表明,纳米胶束球形圆整,粒径分布均一。OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束在pH 7.4的PBS释放介质中,2 h时突释量为15.2%,72 h时释放出41.5%,具有一定的缓释释放效果。以B16黑色素瘤细胞株进行体外细胞毒性、细胞摄取实验。MTT实验结果表明,OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束无明显细胞毒性。摄取实验结果表明,B16细胞对FITC-OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI 胶束的摄取强于 FITC-OVA@VES-g-PEI 胶束和游离FITC-OVA。激光共聚焦显微镜观察发现,OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束具有溶酶体逃逸能力。流式细胞仪定量分析结果显示,与游离OVA组相比,OVA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束可将细胞表面的MHC I-OVA257-264多肽密度从1.4%提高至13.4%。皮下注射B16细胞构建荷黑色素瘤C57BL/6小鼠模型,活体荧光成像结果显示,IR775@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束在肿瘤组织的分布明显高于IR775@VES-g-PEI胶束。体内抑瘤实验结果显示,O VA@mPEG-g-HA/VES-g-PEI胶束具有一定的抑瘤效果。
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