乳腺癌是世界上(包括发达国家和发展中国家)严重危害女性身体健康的恶性肿瘤之一,其发生率呈现逐步增高趋势,且日益趋于年轻化,其中复发和转移是导致乳腺癌患者死亡的首要因素。当前,乳腺恶性肿瘤的治疗手段主要是以手术方式为主的,以化学药物疗法(新辅助疗法)、放射疗法、靶向疗法和内分泌疗法等为辅助手段的治疗方式。但是,这些手段仅仅是在确定乳腺恶性肿瘤疾病后的手段,在其预防复发、转移及晚期乳腺恶性肿瘤的治疗中,仍然不能取得理想效果。近年来逐渐认识到乳腺癌是一种全身性疾病,即早期便可发生肿瘤的扩散,约15%--30%的乳腺癌患者即使术后腋窝淋巴结阴性仍有可能出现远处转移,这提示复发与转移已经存在,血液中出现肿瘤细胞即是重要证据,但未被常规临床诊断手段检测到。血液中出现肿瘤细胞,即外周血循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTCs)是一种从肿瘤原发病灶或者转移病灶中通过多种机制脱离,进而通过EMT方式迁移进入血液并能在外周血液中检测到的一种异质肿瘤细胞,它可以促进乳腺癌、前列腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤疾病的转移和复发,致其疾病进展甚至死亡。外周血中的循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells,CTCs)是恶性疾病扩散的表现形式之一,对这些肿瘤细胞的检测有助于人们进一步认识乳腺癌转移的特征、判断预后,更好地指导治疗并监测治疗效果。目前,大量研究结果表明乳腺癌在疾病发展早期即可发生远处扩散,近年来应用流式细胞技术、反转录PCR等技术提高了检测外周血循环肿瘤细胞的敏感性和特异性,但检出率仍有限,一些明确存在转移灶的患者CTCs阳性率可能很低。原因之一可能是尚未了解CTCs释放的规律(其释放可能是间歇性的),且CTCs常常成群分布,单点时间的检测可能产生一定的偏倚(实际表达可能更高),连续多次取样或加大样本量才会提高检出率及阳性率。再者,检测方法本身也都存在一定的局限性,可能出现假阴性的结果。乳腺癌患者中CTCs计数表达水平在原发病理类型、术前及术后化疗后均不同,本实验将对上述情况进行探讨。目的检验测试乳腺癌CTCs在乳腺恶性病变患者以及乳腺良性病变患者血液中的计数表达,及乳腺癌术前、术后化疗后的计数表达情况,分析是否可以提前预测化疗疗效及乳腺癌临床病理特征之间的关系以及相关性。然后讨论它的计数表达与乳腺恶性肿瘤疾病发生、发展及预后的关系,进而为乳腺癌临床诊断及临床治疗用药提供指导。方法使用免疫组化的实验方式检测乳腺癌病理标本组织中激素受体:雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR),人表皮生长因子(HER-2)和Ki—67表达情况。使用Cellsearch检测系统检测CTCs计数表达,进而分析乳腺癌CTCs表达水平与临床各项指标之间有无关联,具体包括患者发病年龄、肿瘤大小及分期、淋巴结转移、组织学分级、雌激素受体(Estrogenreceptor,ER)、孕激素受体(Progestrogen receptor,PR)、HER-2等表达状态及乳腺癌分子分型和临床化学药物治疗效果。通过病人随诊,研究CTCs计数表达与乳腺恶性肿瘤病人化疗效果及预后之间的关系。所有数据均使用EXCEL2003进行整理统计及用SPSS19.0进行数据分析。结果定义CTCs阳性为每7.5ml血检出CTCs数为5个及以上者。1 CTCs在乳腺良性肿瘤患者和乳腺恶性肿瘤患者中的表达Cellsearch检测系统检测结果表明,在25例乳腺癌患者肘静脉外周血中,CTCs阳性者20例,阴性者5例,检出率800%。在10例乳腺良性肿瘤患者肘静脉外周血中,CTCs阳性者1例,阴性者9例,检出率10%。2 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与患者年龄之间的关系25例乳腺癌患者中,处于青中年(<50岁)的10例,其中CTCs阳性者10例,占100%:处于老年(≥50岁)的有15例,CTCs阳性者10例,占66.7%,CTCs阴性者5例,占33.3%.3 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与HER-2表达之间的关系25例乳腺癌患者经免疫组化学染色和FISH检查确定,HER-2阳性者6例中,CTCs阳性者4例,占67%,阴性者2例,占33%:HER2阴性者16例中,CTCs阳性者14例,占87.5%,CTCs阴性者2例,占12.5%:HER-2表达情况不详者2例中,CTCs阳性者1例,占50%,CTCs阴性者1例,占50%。4 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与雌激素受体ER表达之间的关系25例乳腺癌患者经免疫组化学染色确定,ER阳性者17例中,CTCs阳性者13例,占76.5%,CTCs阴性者4例,占23.5%:ER阴性者8例中,CTCs阳性者7例,占87.5%,CTCs阴性者1例,占12.5%。5 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与孕激素受体PR表达之间的关系25例乳腺癌患者经免疫组化学染色确定,PR阳性者21例中,CTCs阳性者16例,占76.2%,CTCs阴性者5例,占23.8%:PR阴性者4例中,CTCs阳性者4例,占100%.6 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与病理类型之间的关系25例乳腺癌患者的乳腺癌病理标本经病理结果确定,浸润性导管癌22例中,CTCs阳性者17例,占77.3%,CTCs阴性者5例,占22.7%:浸润性小叶癌1例中,CTCs阳性者1例,占100%.其他类型(浸润性大汗腺癌和浸润性导管癌合并浸润性小叶癌)者2例,CTCs阳性者2例,占100%。7 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与肿瘤大小之间的关系25例乳腺癌患者的乳腺癌病理标本经病理测量确定,最大直径<2cm者10例中,CTCs阳性者8例,占80.0%,CTCs阴性者2例,占20.0%:最大直径在2-5cm之间者15例中,CTCs阳性者12例,占80.0%,CTCs阴性者3例,占20.0%。8 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与腋窝淋巴结转移个数之间的关系25例乳腺癌患者的乳腺癌病理标本经病理结果确定,未发生腋窝淋巴结转移者15例中,CTCs阳性者12例,占80.0%,CTCs阴性者3例,占20.0%:腋窝淋巴结转移1-3个之间者6例,CTCs阳性者6例,占100%;腋窝淋巴结转移≥4个者4例中,CTCs阳性者2例,占50.00%,CTCs阴性者2例,占50.0%。9 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与TNM分期之间的关系25例乳腺癌患者中,处于TNMⅠ期者9例中,CTCs阳性者7例,占77.8%,CTCs阴性者2例,占22.2%:处于TNM Ⅱ期者13例中,CTCs阳性者12例,占92.3%,CTCs阴性者1例,占7.7%,处于TNM Ⅲ期者3例中,CTCs阳性者1例,占33.3%,CTCs阴性者2例,占66.7%.10 CTCs在乳腺恶性肿瘤患者中的表达与组织学分级之间的关系25例乳腺癌患者中,处于Ⅱ级者7例中,CTCs阳性者5例,占71.4%,CTCs阴性者2例,占28.6%:处于Ⅲ级者15例中,CTCs阳性者12例,占80.0%,CTCs阴性者3例,占20.0%,处于Ⅳ级者1例,CTCs阳性者1例,占1000%。11.25例手术前后检测CTCs的乳腺癌患者,术前有11例(44.0%)患者可检测到CTCs(≥5/7.5ml血),术后5天有4例(16.0%)患者可检测到CTCs(≥5/7.5ml血)。12.25例乳腺癌患者两周期化疗后,化疗前CTCs(+)11例中,状态由阳性转为阴性的8例,占CTCs(+)的73%。化疗前CTCs(-)14例中,CTCs状态由阴性转为阳性的7例,占CTCs(-)的50%。实验结果显示,乳腺癌患者外周血CTCs表达水平与良性肿瘤患者具有显著差异(P<0.01)。乳腺癌患者外周血CTCs表达水平与乳腺癌患者状态(手术与否)具有显著差异(P<0.05)。乳腺癌患者血清CTCs表达水平与发病年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、ER、PR、HER2、组织学分级、TNM分期无明显相关性(P>0.05)。结论1.乳腺癌患者血清CTCs水平较良性肿瘤患者血清CTCs水平高度表达。表明CTCs的存在与乳腺癌的发生、疾病进展(复发和转移)可能存在相关性。2.在乳腺癌患者中,血清CTCs水平与发病年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移数目、ER受体表达、PR受体表达、HER-2表达、TNM分期、组织学分级等乳腺癌的临床特征无明显相关,不具有统计学意义。3.CTCs可能对乳腺癌的发生和发展具有重要的意义。CTCs的检测方法简单、具有时效性,微创等优点,有可能成为一种新的乳腺癌诊断的方式,并有可能成为乳腺癌临床特征的评价指标。4.手术后CTCs的阳性率显著下降,手术前后CTCs的升降变化与手术的效果相关,表明手术是治疗乳腺癌并降低乳腺癌风险的良好方式。5.化疗后CTCs的阳性率显著降低,化疗前后CTCs的升降变化状态与化疗的疗效相关,提示化疗前后CTCs的变化可以早期预测化疗疗效,并能根据CTCs的变化及时更改化疗方案。