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目的:探究胆总管内注射细菌脂多糖(LPS)在SD大鼠体内是否通过诱导Toll样受体4(TLR4)刺激肝内胆管上皮细胞(IBECs)发生上皮-间质转化(EMT),并观察对TLR4下游核转录因子NF-κB及snail的影响及其可能的作用机制。方法:1.健康SPF级SD雄性大鼠32只,体重在270±10 g范围内,随机将其分为四组(n=8/组),即假手术对照组:SH组、模型组:LPS组、TLR4 sh RNA+LPS组:KD组、阴性病毒对照+LPS组:NC组。2.KD组和NC组尾静脉分别注射腺病毒载体TLR4sh RNA和阴性对照病毒(1x109 PFU/只);96 h后,LPS组、KD组和NC组分别经胆总管逆行注射1 mg/kg LPS,SH组经胆总管逆行注射生理盐水作为对照,于48 h后分离保存肝内胆管组织。3.苏木素伊红(HE)染色观察胆管上皮细胞的组织病理学变化;实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western bolt)检测所取标本中上皮标记物E-cadherin、CK7,间质标记物N-cadherin、MMP-2和TLR4的m RNA和蛋白表达量,以及核转录因子NF-κB p65的磷酸化水平和snail的蛋白表达。4.统计学分析:采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析,所有实验结果以均数±标准误(x±SED)表示,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)法,P<0.05具有统计学意义。结果:1.与SH组相比,LPS组大鼠胆管TLR4 m RNA的表达显著升高(P<0.01);与LPS组和NC组相比,KD组中腺病毒TLR4 sh RNA抑制TLR4基因后TLR4 m RNA的表达显著降低(P<0.01,P<0.01)。TLR4蛋白表达与基因检测结果一致。2.LPS组上皮标记物E-cadherin、CK7的蛋白表达与SH组相比显著降低(P<0.01;P<0.01);而KD组中E-cadherin、CK7蛋白表达与LPS组和NC组相比明显升高(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。E-cadherin、CK7 m RNA表达趋势与蛋白检测结果一致。3.LPS组间质标记物N-cadherin和MMP-2 m RNA的表达较SH组明显升高(P<0.01;P<0.01);而KD组中N-cadherin和MMP-2 m RNA的表达与LPS组和NC组相比显著下调(P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01)。N-cadherin和MMP-2的蛋白表达与基因表达结果一致。4.LPS组NF-κB p65的磷酸化水平及snail蛋白水平显著高于SH组(P<0.05;P<0.01);TLR4基因被抑制后,KD组NF-κB p65的磷酸化水平与snail蛋白表达较LPS组和NC组显著降低(P<0.05,P<0.05;P<0.01,P<0.01)。结论:脂多糖通过激活TLR4诱导大鼠肝内胆管上皮细胞发生EMT,其作用机制与NF-κB/snail信号通路有关。