MLT对银黑狐卵巢组织学及卵母细胞体外成熟影响的研究

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为探索银黑狐卵巢组织结构及发育规律和卵母细胞IVM的培养条件,及褪黑激素(Melatonin,MLT)对银黑狐卵巢组织及卵母细胞IVM的影响,旨在为银黑狐生殖系统的研究提供一定参考及为银黑狐卵母细胞相关试验研究开辟一条卵巢获取新途径。试验于2013年11~12月,采集常规饲养条件下,埋植MLT和未埋植MLT健康一岁龄雌性银黑狐卵巢各80枚,其中分别取12枚卵巢制备石蜡切片进行显微结构观察,两组各观察原始卵泡42个,初级卵泡42个,次级卵泡36个,三级卵泡30个,成熟卵泡30个;两组分别取10枚制备超薄切片进行超微结构观察,平均每个卵巢观察原始卵泡4~5个,初级卵泡3~4个,次级卵泡2~3个,三级卵泡2个,成熟卵泡1个;两组剩余的58枚卵巢进行卵母细胞IVM培养,分别探讨添加不同浓度EGF、FSH+LH、GnRH和PMSG+HCG、MLT对银黑狐卵母细胞IVM的影响。研究结果表明:  1.埋植MLT和未埋植MLT银黑狐卵巢的被膜、皮质和髓质的显微结构相同,各级卵泡和卵母细胞的直径差异不显著(P>0.05);初级卵泡阶段开始出现透明带物质,至次级卵泡阶段发育完整,随卵泡发育透明带的厚度逐渐增厚,二者腔前卵泡卵母细胞透明带厚度差异不显著(P>0.05),而埋植MLT的银黑狐有腔卵泡卵母细胞的透明带厚度显著高于未埋植MLT的(P<0.05)。由此说明,MLT对银黑狐卵巢的一般显微结构和腔前卵泡发育无影响,但对有腔卵泡的发育有一定促进作用。  2.埋植MLT和未埋植MLT的银黑狐原始卵泡卵母细胞内均有少量线粒体和高尔基体,而未埋植MLT的银黑狐卵母细胞中还可见少量滑面内质网;初级卵泡卵母细胞内,均开始形成不完整透明带,线粒体及内质网数量均有所增加,沿透明带出现少量皮质颗粒;次级卵泡阶段,未埋植MLT银黑狐卵母细胞透明带中微绒毛数量较埋植MLT的多;三级卵泡两者透明带厚度继续增加,高尔基体几乎消失;成熟卵泡阶段线粒体移到皮质浅区,高尔基体完全消失,皮质颗粒沿质膜分布。MLT对休情期银黑狐卵巢卵母细胞的线粒体、脂滴、高尔基体、皮质颗粒等细胞器没有影响,仅对初级卵泡阶段滑面内质网的发育有一定影响。  3.以M199为基础培养液,EGF添加浓度为12 ng/ml,培养36 h,添加FSH+LH时卵丘扩散率最高(71.87±2.95)%,显著高于其余三组(P<0.05);添加PMSG+HCG时第一极体排出率最高(4.59±0.52)%,显著高于GnRH组和无激素组。  4.添加FSH+LH、PMSG+HCG和GnRH时,埋植MLT和未埋植MLT的银黑狐卵母细胞体外成熟率未见显著差异(P>0.05)。  5.埋植MLT的银黑狐卵巢可代替常规饲养银黑狐卵巢进行试验研究。
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