自体骨髓干细胞移植对大鼠缺血后肢侧支循环影响的研究

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目的:将非纯化的骨髓细胞悬液和纯化的骨髓干细胞悬液分别移植于清洁级近交雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠缺血的后肢,观察移植后SD大鼠体内血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化以及对缺血后肢血管新生的影响,探讨骨髓干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的价值以及两种移植方法的优劣,为临床治疗下肢缺血性疾病提供理论基础。  方法: SD大鼠30只,随机分为3组:实验1组(n=10):非纯化的骨髓细胞悬液移植组。实验2组(n=10):纯化的骨髓干细胞移植组;对照组(n=10):同法仅注射等量的PBS;先后穿刺SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔各一次,四次抽取骨髓液1ml,第1组制成滤过的骨髓液0.8ml。第2组抽取骨髓液0.8ml,加入PBS液,获骨髓细胞悬浮液,用密度梯度离心法获得纯化的骨髓干细胞,用PBS重悬制成干细胞悬液0.8ml;实验性SD大鼠后肢动脉缺血模型,采用杨盛家报道方法来构建,模型成功建立后,立刻行骨髓细胞移植,术后4周,分别通过RT-PCR法和ELISA法来测定缺血区股部肌肉匀浆VEGF mRNA的表达情况和血清血管内皮生长因子(VEGF)处在哪个水平,激光多普勒血流仪测定皮肤微循环灌注量并进行肢体功能评分;  结果:(1)激光多普勒血流测定仪检测下肢血流改善情况:移植后4周,双侧后肢的皮肤灌注量之差,实验1组为14.1±6.6,实验2组为19.9±7.2,对照组为31.4±9.6,两个实验组较对照组明显减少,差异均有统计学意义(p<0.05);实验1组的双侧后肢皮肤灌注量之差较实验2组皮肤灌注量之差减少,差异有统计学意义(p<0.05)。  (2)评估肢体的功能和对照相比较,两组实验组在术后2周右后肢肢体功能评分都没有明显的差异(P>0.05),不过对于术后3周和4周的情形其差异就比较明显(P<0.05),治疗组显示出较好的肢体功能活动,且术后4周,治疗1组功能评分高于治疗2组,差异有统计学意义(P<0.05),  (3)各组大鼠血清中VEGF含量和肌肉匀浆中VEGF mRNA检测结果的比较术后4周,两个实验组动物血清中VEGF含量较对照组明显升高,并且实验1组动物血清中VEGF含量高于实验2组动物,差异均有统计学意义(p<0.05);两个实验组后肢肌肉匀浆VEGF mRNA的表达较对照组明显增高(P<0.05),实验1组肌肉VEGF mRNA的表达高于实验2组(P<0.05).  结论:  1.非纯化的骨髓细胞和纯化的骨髓干细胞分别移植治疗大鼠后肢缺血是有效的。VEGF表达水平与缺血后肢侧支循环的建立呈正相关。  2.非纯化的骨髓细胞移植对缺血区侧支循环形成能力的影响高于纯化的骨髓干细胞移植治疗。
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