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目的:恶性淋巴瘤(malignant lymphoma, ML)起源于淋巴结和淋巴组织,是与免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关的免疫系统的恶性肿瘤,为儿童期常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年升高之势。目前联合化疗仍是其治疗的主要手段,但常用化疗药物的毒副作用引起的机体抵抗力下降及重度感染等是影响患儿长期生存的重要因素之一。因而,寻求一种高效低毒治疗淋巴瘤的药物对改善患儿的预后和生活质量具有十分重要的意义。榄香烯(elemene)是从中药温莪术根茎提取的抗癌有效成分,是一种新型的抗癌药,以其独特的药理作用被广泛用于治疗多种肿瘤,具有很强杀灭肿瘤细胞及抑制肿瘤生长的作用。其抗癌谱广、高效、安全、无毒,对肝肾功能无损害,无骨髓抑制,能提高患者的生存质量。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白逆转录酶,它由RNA和蛋白质组成,包括3个主要部分,即人端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR)、人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)和端粒酶相关蛋白(telomerase associated protein, TEP)。端粒酶重新表达在肿瘤细胞逃避衰老的过程中起着重要作用,它的激活可稳定端粒长度甚至使细胞获得永生。端粒酶活性阳性表达与肿瘤的发生发展、分化程度等密切相关,可用于判断肿瘤良恶性及预后。端粒酶成为目前已知的最为广谱的肿瘤标志物之一。hTERT是含有7个基元的逆转录酶,是端粒酶活性的催化亚单位,进一步的机制研究发现,端粒酶活性主要在转录水平进行调节,因此,hTERT是端粒酶活性调节的一个决定因素。在大多数的恶性肿瘤中可检测到hTERT启动子的活化并与端粒酶活性有高度的相关性。目前关于榄香烯诱导淋巴瘤细胞增殖与凋亡及其对淋巴瘤细胞系hTERT的影响尚未见研究报道。本实验通过体外培养人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞,观察榄香烯对Raji细胞增殖、凋亡及细胞周期分布的影响,并检测hTERT在细胞中的表达情况,初步探讨榄香烯对恶性淋巴瘤的作用,并通过研究榄香烯对hTERT的影响进而来研究其发挥抗肿瘤作用的可能机制,为榄香烯的临床应用提供理论依据。方法:体外培养人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞,用不同浓度的榄香烯进行干预。应用MTT比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)分析榄香烯对细胞周期的影响并检测细胞凋亡的情况;应用RT-PCR法检测细胞中hTERT mRNA的表达水平。结果:1 MTT比色试验结果表明:榄香烯各浓度组作用于Raji细胞24h后抑制率分别为5.24%,13.29%,25.11%,58.39%;48h后抑制率分别为23.43%,29.94%,37.23%,72.25%;72h后抑制率分别为28.80%,53.00%,68.97%,81.3%。各实验组作用于Raji细胞24、48、72h后吸光度值与对照组相比均有统计学意义(P<0.05),同时各浓度组之间以及时间组之间差异有统计学意义(P<0.05)。2流式细胞术检测结果显示:榄香烯各浓度组作用于Raji细胞48h后,榄香烯各处理组G0/G1期细胞比例分别为(54.78±0.33)%,(59.89±0.27)%,(68.71±0.23)%,(74.78±0.26)%;S期细胞比例分别为(21.30±0.26)%,(19.73±0.28)%,(19.30±0.25)%,(18.18±0.20)%;G2/M期细胞比例分别为(23.89±0.18)%,(20.37±0.33)%,(12.04±0.21)%,(7.34±0.22)%。对照组处于G0/G1期,S期,G2/M期细胞比例分别为(50.30±0.48)%,(25.20±0.35)%,(24.51±0.30)%。与对照组相比,榄香烯各实验组细胞周期分布发生明显变化(P<0.05)。经单因素方差分析,各浓度组间榄香烯对细胞周期的影响有统计学意义(P<0.05)。3流式细胞术检测结果显示:榄香烯各浓度组作用于Raji细胞48h后出现明显的凋亡峰,凋亡率分别为(5.66±0.33)%,(6.24±0.36)%,(6.95±0.29)%,(17.20±0.27)%;对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰,其凋亡率为(2.20±0.34)%。榄香烯各实验组细胞凋亡率与对照组相比发生明显变化(P<0.05)。经单因素方差分析,各浓度组间榄香烯对细胞凋亡率的影响有统计学意义(P<0.05)。4 RT-PCR检测结果显示:10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml榄香烯各处理组作用Raji细胞48h后hTERT mRNA相对表达量分别为0.82±0.022,0.72±0.020,0.50±0.016,0.47±0.019。对照组的hTERT mRNA相对表达量为0.90±0.030,榄香烯各浓度组hTERT mRNA相对表达量与对照组相比,均具有统计学意义(P<0.05)。榄香烯不同浓度组间下调hTERT mRNA相对表达量具有统计学意义(P<0.05)。结论:1榄香烯体外对Raji淋巴瘤细胞生长具有明显的抑制作用,且在10-40μg/ml范围内呈时间、剂量依赖性。2榄香烯使Raji细胞G0/G1期细胞数增多,S和G2/M期细胞数减少。通过阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制Raji细胞的增殖,此可能为榄香烯抗肿瘤的作用机制之一。3本研究观察到,药物干预前,Raji淋巴瘤细胞中hTERT高表达,提示肿瘤细胞中hTERT与端粒酶活性及肿瘤细胞的无限增殖能力之间存在内在联系。4榄香烯体外可抑制Raji淋巴瘤细胞中hTERT的表达,并呈明显的剂量依赖关系,认为榄香烯诱导Raji淋巴瘤细胞凋亡的作用可能是由于肿瘤细胞的hTERT表达水平降低而引起的端粒酶活性异常,这可能是榄香烯又一抗肿瘤的机制。