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目的观察ING4基因在肿瘤发生中转录水平的变化和突变情况;克隆人骨髓间质干细胞ING4(inhibitor of growth famility,member4)基因,改造慢病毒表达载体并构建ING4基因慢病毒表达载体PNL-ING4方法培养多种肿瘤细胞株,包括肺腺癌细胞株(A549)、宫颈癌细胞株(Hela)、结肠癌细胞株(SW480)、小细胞肺癌细胞株(LTEP-a-2)、前列腺癌细胞株(PC3)、白血病干细胞(LSC)及hMSC来源肿瘤细胞(F6)和胃癌组织中分离的间质干细胞(GC-MSC),以成人骨髓间质干细胞(hBM-MSC)、人脐静脉内皮细胞(UVEC-304)为对照,收集白血病患者骨髓和胃癌患者癌组织,采用RT-PCR和Real-Time PCR技术研究各种细胞、白血病患者骨髓和胃癌组织中ING4基因的表达水平变化;从hBM-MSC、LSC、SW480、F6和慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞cDNA中克隆ING4基因并测序观察ING4基因的突变情况;经RT-PCR扩增出hBM-MSC来源的全长ING4cDNA,克隆、鉴定并测序后与重组改造慢病毒表达载体PNL-ires连接,构建慢病毒表达载体PNL-ING4,经双酶切、基因测序进行鉴定。采用脂质体方法转染293T细胞,通过RT-PCR检测ING4基因的表达。结果RT-PCR表明在LTEP-a-2、SW480、LSC、Hela、PC3、F6、GC-MSC、hBM-MSC、UVEC-304、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中有不同水平ING4基因表达,其中LSC、ALL和CML患者骨髓中表达量较低,而在A549和胃癌患者癌组织中表达量极低。定量PCR显示,ING4基因在A549、LTEP-a-2、SW480、GC-MSC、PC3、Hela、UVEC-304、hBM-MSC和F6中均有表达,表达量以A549最低,F6最高,而UVEC-304和hBM-MSC居中。全长测序显示,在hBM-MSC第七代和第九代、LSC、SW480、F6、CML患者骨髓中均发现缺失及错配,缺失大部分发生在NLS域内,错义突变和移码突变也有发现。且随着骨髓间质干细胞传代数目的增多,点突变和缺失的频率也越来越高。从hBM-MSC中克隆ING4基因全长并改造慢病毒表达载体PNL-ires,构建了PNL-ING4慢病毒表达载体,双酶切和基因测序正确。包装293T细胞后可见绿色荧光,转染效率可达80%以上,并可检测出ING4基因的表达。结论ING4基因在不同肿瘤细胞中呈不同水平的表达,部分表现出表达产物发生突变。这些因素都是通过改变ING4的表达水平或生物活性,参与肿瘤的发生,特别值得关注的是,在MSC体外突变致瘤中,ING4表达突变是其中一个重要原因。成功构建ING4慢病毒表达载体PNL-ING4,为研究ING4基因在肿瘤发生中的作用与肿瘤基因治疗奠定基础。