【摘 要】
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该研究从人外周血PMN中提取细胞总RNA;采用RT-PCR方法扩增BPI N端基因片段,将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析;经双酶切、连接、转化后克隆入pUC19载体;序列分 析表明:所
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该研究从人外周血PMN中提取细胞总RNA;采用RT-PCR方法扩增BPI N端基因片段,将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析;经双酶切、连接、转化后克隆入pUC19载体;序列分 析表明:所克隆的基因包括信号肽在内的BPI活性片段编码序列,长度为726 bp编码BPI N端前205个氨基酸;与文献报道的序列相比,有6个核苷酸差异,推导有4个氨基酸变化,揭示 中国人BPI N端基因可能存在特殊性;基因内无终止码,为开放读框,含有维持BPI结构与功能所必须的3个半胱氨酸,符合人BPI基因的特征.将重组质粒pUC-BPI中的目的基因克隆入 质粒pcDNA3构建真核表达载体pcDNA-BPI,通过脂质体转染COS-7细胞进行瞬时表达,表达产物在SDS-PAGE中可显示一条相对分子质量约为25kDa的外源蛋白带,与预期的BPI蛋白片段的大小基本一致,Western blot证实,该蛋白带即为重组表达的BPI.BPI基因的克隆及真核表达取得成功,为获取大量的BPI重组蛋白,深入研究BPI的生物学功能,探讨其杀菌和中和内毒作用机制,及其用于脓毒症的治疗奠定了良好的基础.
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