扬子鳄外周血细胞染色体制片及多态微卫星位点的染色体定位

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扬子鳄(Alligator sinensis)是我国特有的淡水鳄,被IUCN列为极危物种。在科研和工作人员努力下,保护区扬子鳄的数量不断增加。染色体结构与功能和分子标记的定位研究却相对较少。染色体的形态结构承载着物种的特有信息,是细胞生物学研究中必不可少的部分。分子标记也以其独有的优点被应用到多个生物学领域。研究内容主要分为两部分:一、利用扬子鳄外周血细胞制备中期染色体标本。制作动物染色体标本是细胞遗传学最基本的技术,是研究染色体和进行基因定位等实验的先决条件。根据材料有四种主要的方法,其中,外周血制片取材方便、对研究对象伤害小且分裂相较多,所以本研究首次利用扬子鳄外周血细胞制备染色体标本,为以后研究扬子鳄染色体结构和进行其他与染色体有关的科学实验提供了一种切实可行的方法。二、将扬子鳄微卫星位点定位到染色体上。微卫星是一类具有高度多态性的遗传标记,对其进行染色体定位有利于筛选出一套无明显连锁,分布均匀的扬子鳄微卫星的位点,有利于弥补常规分子遗传图谱的偏差。本研究以浙江长兴尹家边扬子鳄保护区的扬子鳄为对象,利用外周血细胞制片的方法,对其进行中期染色体玻片的制备。在此基础上,利用胰酶处理法对染色体进行姬姆萨染色,使用ImageJ软件对扬子鳄染色体进行测量和分析,并挑选出分裂相良好的玻片,利用荧光原位杂交方法,将微卫星位点定位到扬子鳄染色体上。主要研究结果如下:(1)利用扬子鳄外周血细胞制备染色体玻片,获得了200张分散良好且染色体完整的扬子鳄中期染色体玻片。(2)获得了5对扬子鳄大染色体的臂比值和相对长度数据,分析表明它们都属于中着丝粒染色体。(3)利用荧光原位杂交技术,将扬子鳄微卫星位点CXA-138定位到一对同源染色体上。本研究利用外周血细胞制备中期染色体标本,并成功利用荧光原位杂交方法将扬子鳄微卫星位点定位到染色体上,为以后扬子鳄染色体研究及基因定位相关研究奠定了基础。
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