食管鳞状细胞癌中基因的异常表达及其临床意义的研究

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目的:研究人食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织的基因表达谱,通过对比基因表达的差异,寻找与人食管鳞癌发生、发展相关的基因。  方法:1.应用基因芯片技术检测食管鳞癌中的差异表达基因。提取人食管鳞癌组织与癌旁正常组织的mRNA,逆转录成cDNA,并用Cy3-dUTP标记正常食管组织,用Cy5-dUTP标记食管鳞癌组织,制成探针,与基因芯片进行杂交,经扫描仪扫描后,对获取的信号数据进行软件分析、对比,筛选出差异表达的基因;  2.应用免疫组织化学方法对差异表达的NFκB和CyclinD1以及相关的C-Src和 EGFR进行蛋白表达的检测,探讨其与食管鳞癌发生发展及生物学行为的关系。  结果:1.应用基因芯片技术检测4例食管鳞状细胞癌及癌旁正常组织的新鲜标本,发现4329条基因发生差异表达,其中2293条上调,2036条下调,根据GO(gene ontology)分类,将这些基因按GO分子功能(function term)分为37类,其中与细胞分化、成熟,分子定位、连接,信号传导,酶活性调节,以及基因转录、翻译调节有关的基因最多;2.表达上调的NFκB具有5种分子功能,参与多种生物学过程,在细胞的恶性转化过程中起重要作用。3.在差异表达的基因中有许多基因与NFκB有相同的功能。4.用免疫组织化学方法检测表达上调的NFκB和CyclinD1以及C-Src和EGFR的蛋白表达情况。在100例食管鳞癌组织及30例正常对照食管组织中,NFκB在正常上皮无表达(0%,0/30),在癌组织中表达显著增强(61%,61/100),两者相比有统计学意义(p>0.05),但表达强度与食管癌的分化程度、浸润深度无关(p>0.05),而与淋巴结转移相关(p<0.05);CyclinD1在正常鳞状上皮中有表达(33.33%,10/30),在癌组织中表达增强(57%,57/100),两者相比有统计学意义(p<0.05),在癌组织中表达强度与组织学分级及淋巴结转移有关(p<0.05),与浸润深度无关(p>0.05);C-Src在正常上皮中有表达(20%,6/30),在癌组织中表达增强(59%,59/100),两者相比有统计学意义(p<0.05),在癌组织中表达强度与分化程度、浸润深度、淋巴结转移均相关(p<0.05);EGFR在正常上皮中有表达(30%,9/30),在癌组织中表达增强(67%,67/100),两者相比有统计学意义(p<0.05),在癌组织中表达强度与分化程度及浸润深度、淋巴结转移均相关(p<0.05)。5.在食管鳞癌中,NFκB和CyclinD1、C-Src、EGFR蛋白表达具有相关性(p<0.05)。  结论:1.食管鳞癌的发生发展与多基因的异常表达有关。2.应用基因芯片技术可以对食管鳞癌的基因表达谱进行分析,以筛选食管鳞癌相关基因。3. NFκB在食管鳞状细胞癌中表达增强,但与食管鳞癌的分化程度、浸润深度无关,而与淋巴结转移相关,提示NFκB可能参与食管鳞癌的发生和淋巴结转移。4.CyclinD1在癌组织中表达增强,且表达强度与分化程度、淋巴结转移相关;EGFR,C-Src在癌组织中表达增强,且表达强度与分化程度、浸润深度、淋巴结转移均相关,提示CyclinD1,EGFR,C-Src可能参与食管鳞癌的发生及演进过程。5.在食管鳞癌中,NFκB和CyclinD1、C-Src、EGFR的蛋白表达存在相关性,提示NFκB促进食管鳞癌的发生、发展的机制与CyclinD1、C-Src、EGFR的作用有关系。
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