论文部分内容阅读
人工授精(Artificial insemination,AI)技术是提高家畜繁殖效率的重要环节,因此筛选获得高质量的猪冷冻精液尤为重要。检测种公猪精液品质是鉴定种公猪是否具有正常繁殖能力的重要环节,也是猪选种、育种工作中最基本的一项衡量指标,间接影响生产效益。因此,筛选可生产高品质精液的种公猪尤为重要。从优化猪冷冻精液配方及筛选出优势基因型两方面出发,试验结果如下:1.为优化冷冻精液配方,将品质佳的精液平均分为7组,即对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,其中对照组不添加抗氧化剂及冷冻保护剂,试验Ⅰ组添加100μmol/L绿原酸(chlorogenic acid,CGA),试验Ⅱ组添加40μmol/L咖啡酸苯乙酯(phenethyl caffeate,CAPE),试验Ⅲ组添加0.5g/L聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)5,试验Ⅳ组添加100μmol/L CGA和0.5g/L PVP,试验Ⅴ组添加40μmol/L CAPE和0.5g/L PVP,试验Ⅵ组添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5g/L PVP进行液氮冷冻保存,30 d后解冻精液,测定结果表明:与对照组相比,添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5 g/L PVP的冷冻精液在精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性均出现极显著提高(P<0.01);DNA完整性、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性均显著提高(P<0.05);活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平极显著降低(P<0.01);丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平显著降低(P<0.05)。说明在猪精液冷冻基础液中同时添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5 g/L PVP可提高新吉林黑猪冷冻精液品质。2.优化配方后,对88只公猪精液进行冷冻处理,通过冷冻精液提取基因组,进行DNA测序和HRM分型,结果显示:在公猪AQP7基因exon7上检测出一个SNP位点C187T,共有3种基因型,氨基酸序列并未发生改变;在公猪LPAR1基因exon2上检测出一个SNP位点T136C,共有2种基因型,氨基酸序列并未发生改变;在公猪HSP90基因exon3和exon9上各检测出一个SNP位点,分别为C129A和C176T,各有3种基因型,C129A处氨基酸序列并未发生改变,C176T处氨基酸序列发生错义突变,由谷氨酸突变为丙氨酸;在公猪CRISP3基因exon5上检测出一个SNP位点A159G,共有2种基因型,氨基酸序列发生错义突变,由苏氨酸突变为丙氨酸。各候选基因的SNP位点在检测公猪群体中分布较为均匀,各位点符合Hardy-Weinberg定律,处于Hardy-Weinberg遗传平衡,且均介于0.25<PIC<0.5,处于中度多态。3.检测冷冻精液在精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性及DNA完整性等冷冻精液品质指标。检测结果表示:在AQP7基因C187T位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且TT基因型和CC基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显著性差异(P<0.01)。该位点各基因型的DNA完整率无显著性差异(P>0.05)。在LPAR1基因T136C位点上,TC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且TT基因型和TC基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显著性差异(P<0.01)。该位点各基因型的DNA完整率无显著性差异(P>0.05)。在HSP90基因C129A位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且AA基因型和CC基因型在活力、顶体完整率和质膜完整率等方面均达到了极显著性差异(P<0.01),AA基因型与CA基因型和CC基因型在线粒体活率与DNA完整率两方面均达到了显著性差异(P<0.05)。在HSP90基因C176T位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率和质膜完整率均为最高,且TT基因型和CC基因型在活力、顶体完整率和质膜完整率等方面均达到了极显著性差异(P<0.01),TT基因型与CT基因型和CC基因型在线粒体活率与DNA完整率两方面均达到了显著性差异(P<0.05)。在CRISP3基因A159G位点上,AA基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且AA基因型和AG基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显著性差异(P<0.01),且DNA完整率达到了显著性差异(P<0.05)。