苯并氧杂吖庚因类化合物的合成及其对内质网应激的抑制作用研究

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背景:  前期课题组通过路易斯酸催化多米诺反应方法,以二氯甲烷为溶剂,采用MeSiCl3/DMF作为催化剂催化具有α-H的直链醛与N-甲基苯胺反应,合成了新型的苯并氧杂吖庚因类化合物。  目的:  1、探索更绿色的合成方法并扩大反应底物。  2、探索新化合物对内质网应激的抑制作用。  3、探索抑制内质网应激的作用通路。  方法及结果:  1、前期采用MeSiCl3/DMF为催化剂,反应后处理繁琐。探索了更绿色的合成方法,不加入催化剂,直接将具有α-H的直链醛与N-甲基苯胺反应。筛选了DCM、DMF、氯仿等不同溶剂,0℃、25℃、-20℃等不同反应温度,两种反应底物(醛与N-甲基苯胺)用量比例(1∶1.2、2∶1、1∶2)等反应条件后,确定了最佳反应条件:以氯仿为溶剂,反应温度为0℃,反应底物用量比为2∶1,反应时间为1h。通过上述最佳条件合成了16个含氮氧的七元杂环化合物,其中8个为新化合物。  2、对上述合成的化合物探索其对内质网应激抑制的活性筛选。用浓度为10μM的毒胡萝卜素(TG)刺激PC12细胞,使之处于过度应激状态。在给药浓度为10μM时,采用Western blot方法筛选出具有抑制内质网应激活性的化合物。与标准对照物相比,化合物d、e、f、g、1、2、3、6、7共9个化合物表现出较强的抑制活性。  3、逐渐降低给药浓度,筛选出化合物g在上述16个化合物中抑制内质网应激作用最强。同时对化合物g进行免疫荧光检测佐证,结果显示给用化合物g组比TG组及给用化合物4-PBA组的荧光强度弱,说明化合物g能有效抑制内质网应激的作用,并且其作用比4-PBA强。  4、探索了化合物g和化合物7对内质网应激抑制的作用通路。采用Western blot方法,发现化合物g和化合物7均是通过抑制ATF6这一通路来抑制内质网应激的。  结论:  探索出比我们已报道的更加绿色的合成方法,成功合成了16个化合物,其中8个为新化合物。通过Western blot方法,在16个化合物中筛选出抑制内质网应激效果最好的化合物g和化合物7。进一步实验发现它们通过抑制ATF6这一通路来抑制内质网应激。
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