RNA干扰叶酸受体1基因对鼻咽癌细胞耐药的影响

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许多研究表明,无论是肿瘤细胞的内在性耐药,还是获得性耐药、或是多药耐药现象,都有许多分子参与其耐药的过程,使肿瘤耐药的分子机制非常复杂,大体包括靶基因突变,靶基因扩增、DNA损伤修复能力差异、药物进入肿瘤细胞内浓度减少等。前期研究中,结果显示出FOLR1在紫杉醇耐药细胞中高表达,且与耐药指数呈正相关。因此,进一步研究FOLR1在鼻咽癌耐药过程中的作用有重要意义。目的:利用RNA干扰技术抑制鼻咽癌紫杉醇耐药细胞的FOLR1基因的表达,同时观察鼻咽癌耐药细胞的耐药表型的变化。方法:1.以人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞及被诱导产生的紫杉醇耐药细胞株CNE-1/Taxol为研究对象。2.应用集落形成实验检测紫杉醇对各细胞系的生长抑制作用。3.针对FOLR1设计siRNA干扰分子,转染到鼻咽癌耐药细胞系,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)、Western Blot测定RNA干扰前后FOLR1基因在耐药细胞中的表达差异。4.用集落形成实验(colony formation assay)检测FOLR1基因表达抑制后亲本细胞及耐药细胞耐药性的变化,从而确定FOLR1在鼻咽癌产生耐药的过程中的作用。结果:1.针对FOLR1基因的siRNA转染耐药细胞CNE-1/Taxol后,细胞FOLR1的mRNA及蛋白表达均明显下调。2.FOLR1基因表达抑制后,CNE-1/Taxol对紫杉醇的敏感性显著增高,其IC50值降低了2.47倍,从而部分逆转CNE-1/Taxol的耐药。结论:1.针对FOLR1基因的特异性siRNA分子能有效的抑制FOLR1基因的表达。2.运用RNA干扰技术抑制FOLR1基因可部分逆转人鼻咽癌紫杉醇耐药细胞CNE-1/Taxol的耐药性。3.FOLR1基因可能成为逆转鼻咽癌细胞抵抗紫杉醇耐药及肿瘤治疗的靶分子。
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