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目的:本实验以中耳胆脂瘤具有鳞状上皮大量增殖和邻近骨质的广泛性破坏的两大特征为出发点,通过检测COX-2和PTEN在中耳胆脂瘤中的表达情况,分析两者在胆脂瘤的发生发展过程中的作用及相互间的关系。方法:1.免疫印迹法:收集自2018年5月-2018年12月在西南医科大学附属医院耳鼻咽喉-头颈外科因中耳胆脂瘤或慢性化脓性中耳炎活动期行乳突改良根治术+鼓室成型术的患者术中新鲜标本,取得的标本置于-80°C的冰箱保存。共收集中耳胆脂瘤35例,中耳肉芽20例,对照组为10例正常外耳道皮肤,随机从上述患者的术中取得。通过westerrn blot免疫印迹法检测COX-2和PTEN在三组中的表达。应用Image J软件分别检测三组的相对灰度值,结果通过SPSS 22.0软件采用t检验进行两两比较,COX-2和PTEN两者之间采用pearson进行相关性分析,所有结果以P<0.05为差异有统计学意义。2.免疫组化:在上述同一时间段内收集患者的术中标本,用10%中性福尔马林固定24小时后取出,将其制成石蜡块,其中中耳胆脂瘤石蜡块20例,中耳肉芽石蜡块10例,正常外耳道皮肤石蜡块10例。采用免疫组化方法检测COX-2和PTEN在三组中的定位及定量分析。应用image pro plus软件对免疫組化染色图片进行平均光密度值测定,通过SPSS 22.0统计软件采用t检验进行两两比较,COX-2和PTEN两者之间采用pearson进行相关性分析,所有结果以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.免疫印迹法结果:通过Image J图像分析软件对三组条带进行灰度值测定,在中耳胆脂瘤组、中耳肉芽组以及正常外耳道皮肤组中COX-2的表达情况依次降低,其三组内的相对灰度值分别为0.8019±0.2323,0.6432±0.1965,0.4518±0.1342。将三组的相对灰度值相互间进行两两比较,发现COX-2在胆脂瘤上皮中的表达明显高于其他两组,差异均具有统计学意义(p<0.05)。且在胆脂瘤组中,有听小骨破坏组中COX-2的表达高于无听小骨破坏组,差异有统计学意义(p<0.05)。通过Image J软件测得PTEN在胆脂瘤上皮、肉芽组织以及外耳道皮肤上皮中的相对灰度值依次为0.4605±0.1449,0.7123±0.1283,0.8016±0.1197。将三组间的相对灰度值相互间进行两两比较,发现PTEN在胆脂瘤上皮中的相对表达量最低,与中耳肉芽及正常外耳道皮肤相比较,差异均具有统计学意义(p<0.05),中耳肉芽组与正常外耳道皮肤组相比较,PTEN表达差异不具有统计学意义(p>0.05)。且在胆脂瘤组中,有听小骨破坏组中PTEN的表达低于无听小骨破坏组,差异有统计学意义(p<0.05)。COX-2和PTEN通过pearson检测方法进行相关性分析,二者在胆脂瘤上皮中的相对表达量具有显著负相关(r=-0.659,p=0.00<0.05)。2.免疫租化的结果:COX-2阳性表达定位于细胞浆。COX-2在中耳胆脂瘤上皮中染色最强,呈中-强度阳性染色,阳性细胞主要集中在基地层(平均光密度值:0.361±0.126)。COX-2在中耳炎性肉芽中呈弱阳性-中等强度阳性表达(平均光密度值:0.262±0.072),主要分布在新生的毛细血管及周围浸润的炎性细胞。COX-2在外耳道皮肤上皮中呈弱阳性-阴性表达(平均光密度值:0.191±0.037)。COX-2在中耳脂瘤组的表达与中耳肉芽组及正常外耳道皮肤组两两进行比较,差异均具有统计学意义(p<0.05)。在中耳胆脂瘤组内,无听小骨破坏组多呈中等强度染色(平均光密度值:0.251±0.024),而在有听小骨破坏组中,多呈强阳性染色(平均光密度值:0.397±0.124),差异经统计学分析比较有统计学意义(p<0.05)。PTEN阳性表达主要位于细胞核,表现为细胞核呈棕黄色或黑褐色颗粒。在胆脂瘤上皮中PTEN阳性细胞主要位于基底层,染色强度呈弱阳性染色(平均光密度值:0.257±0.082)。在中耳肉芽中,PTEN呈中等强度阳性染色(平均光密度值:0.360±0.081),阳性细胞散在分布于新生的毛细血管及周围的炎性细胞中。在正常外耳道皮肤中,PTEN阳性细胞主要分布在上皮细胞的基底层和基底上细胞层,呈中-强度阳性染色(平均光密度值:0.416±0.065)。通过SPSS 20.0软件对三组数据进行比较,胆脂瘤组中PTEN的表达明显低于肉芽组和外耳道皮肤组,差异有统计学意义(p<0.05),且在中耳胆脂瘤组内有听小骨破坏组PTEN的表达(平均光密度值:0.229±0.065)低于无听小骨破坏组(平均光密度值:0.342±0.072),比较两者间的差异同样具有统计学意义(p<0.05)。PTEN的表达在中耳肉芽组织与正常外耳道皮肤上皮中,两者比较差异无统计学意义(p>0.05)。胆脂瘤组COX-2和PTEN的平均光密度值经person相关性分析,二者具有显著负相关性(r=-0.448,p=0.004)。结论:1.在中耳胆脂瘤和慢性化脓性中耳炎肉芽组织中COX-2的表达均明显增高,提示COX-2可能在这两种疾病的发生发展过程中起重要作用。2.在中耳胆脂瘤中PTEN的表达明显降低,PTEN可能通过促进PI3K-Akt信号通路诱导胆脂瘤上皮细胞过度增殖和抗凋亡,在促进中耳胆脂瘤的发生发展中起重要作用。3.在胆脂瘤组内COX-2在有听小骨破坏组中的表达明显高于无听小骨破坏组,而PTEN在有听小骨破坏组中的表达水平明显低于无听小骨破坏组,提示COX-2的高表达和PTEN的低表达可能还参与了中耳胆脂瘤的骨质破坏。4.中耳胆脂瘤中COX-2与PTEN表达呈显著负相关,表明PTEN表达的减少与COX-2表达的增加之间可能存在某种相互调控的关系,这种相互调控的关系与中耳胆脂瘤的发生发展密切相关。