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小麦叶锈菌是一种活体寄生真菌,由叶锈菌引起的小麦叶锈病对小麦生产危害严重。小麦慢叶锈抗性表现为菌丝扩展延缓、吸器数量减少,该抗性具有数量遗传特性,一般没有明显的生理小种专化性,因此有利于保持抗病的稳定和持久性。本试验以小麦品种冀麦3号和5389分别与叶锈菌生理小种260组成慢叶锈性及亲和性组合,探讨TaEDS1和TaPAD4在慢锈性抗性中的作用及其作用机制,获得如下结果: 1.通过Filourescent Brightener染色明确慢叶锈性组合中叶锈菌的发育进程。 2.利用RT-qPCR检测TaEDS1和TaPAD4在慢叶锈及亲和组合中接菌后不同时间点的表达特点。结果表明,在慢锈组合接种后48h,两基因均被诱导表达,而在亲和组合中,两个基因的表达没有明显变化。 3.利用VIGS技术在慢叶锈小麦品种冀麦3号叶片沉默TaEDS1和TaPAD4基因,然后接种叶锈菌小种260,发现TaEDS1及TaPAD4基因沉默后,接种叶锈菌后48h的单侵染点吸器母细胞数和接种96h菌丝扩展面积均大于对照组。说明TaEDS1及TaPAD4的沉默均可促进叶锈菌的发育;通过对沉默叶片进行苯胺蓝染色,发现接种叶锈菌后48h、96h,对照组中各侵染点寄主叶肉细胞均有胼胝质的产生,而TaEDS1及TaPAD4的沉默叶片均没有胼胝质的形成。说明TaEDS1及TaPAD4是通过影响寄主胼胝质沉积而参与慢叶锈性抗性的调控。 4.构建p-Super1300∷TaEDS1-GFP和p-Super1300∷TaPAD4-GFP载体,通过农杆菌侵染转化烟草,结果发现这两个蛋白都定位在细胞核中。 5.构建酵母双杂交载体pGADT7-TaPAD4,与实验室已有的pGBKT7-TaEDS1共转化酵母,结果显示TaEDS1和TaPAD4可发生相互作用。 6.构建pSPYNE173-TaEDS1、pSPYNE173-TaPAD4、pSPYCE(MR)-TaEDS1、pSPYCE(MR)-TaPAD4双分子荧光互补载体,通过农杆菌侵染共转化烟草证明TaEDS1和TaPAD4在烟草细胞中能够发生相互作用。