论文部分内容阅读
目的:探讨在碱烧伤后角膜融解损伤病理作用中不同时间内起主要组织损伤作用的基质金属蛋白酶的类型;探讨活化Zn2+离子对碱烧伤后角膜融解损伤不同时期异常高表达的基质金属蛋白酶的抑制作用。方法:建立中度角膜碱烧伤小鼠实验动物模型,应用明胶酶谱、蛋白质印迹法以及免疫组织化学技术检测碱烧伤后3日、1周以及1个月时角膜组织内基质金属蛋白酶-1,2及9的表达情况。应用不同浓度Zn2+离子溶液(0.1mmol/L及1mmol/L)对碱烧伤后角膜组织进行局部干预。应用明胶酶谱以及蛋白质印迹法检测角膜碱烧伤后3日及1周时不同浓度Zn2+离子溶液实验亚组以及对照组角膜组织内中-1,2及9的表达情况。结果:应用明胶酶谱方法观察到碱烧伤后3日角膜组织内基质金属蛋白酶-9表达显著的升高,呈现高水平表达,碱烧伤后1周其表达量显著下降,而碱烧伤后1个月时角膜组织内观察不到基质金属蛋白酶-9的表达。基质金属蛋白酶-2与之相反,在碱烧伤后3日角膜组织内仅呈现低水平表达,碱烧伤后1周其角膜组织内表达量显著升高,呈现高水平表达,碱烧伤后1个月时其表达量再次降低,呈现中度水平表达。应用蛋白质印迹法以及免疫组织化学方法观察的碱烧伤后3日、1周及1个月组织内基质金属蛋白酶-9及2的表达变化情况与应用明胶酶谱方法观察的情况相符,即:基质金属蛋白酶-9在碱烧伤后急性期高表达,且其高表达主要位于靠近角膜上皮层区域,而后表达量逐渐降低;基质金属蛋白酶-2在碱烧伤后急性期表达水平较低,而在碱烧伤后1周呈现高水平表达,不同于基质金属蛋白酶-9,其高表达分布于角膜基质内,其后表达量再次降低,呈现中度水平表达。应用蛋白质印迹法以及免疫组织化学方法观察到碱烧伤后组织内不同时期基质金属蛋白酶-1在角膜碱烧伤后组织内的表达变化趋势与基质金属蛋白酶-2相似,在碱烧伤后1周时表达水平最高,其后表达量下降,但其各时期表达量普遍较低。另一方面,研究通过明胶酶谱以及蛋白质印迹法观察到应用活化Zn2+离子干预的实验组较对照组角膜组织在碱烧伤后3日对高水平表达的基质金属蛋白酶-9以及碱烧伤后1周对呈现最高峰表达的基质金属蛋白酶-2及1的表达量均有明显的抑制作用,其抑制作用呈现剂量正相关性。结论:基质金属蛋白酶-9在碱烧伤后主要通过降解角膜上皮基底膜打通组织屏障使更多免疫损伤介质浸润角膜基质的方式,参与碱烧伤后角膜组织的病理性损伤过程。而基质金属蛋白酶-2则承担了更为重要的实质性组织损伤作用。研究亦从活体体内观察层面证实了活化Zn2+离子的局部应用对角膜碱烧伤后组织内基质金属蛋白酶的表达存在有效的抑制作用,从而为其应用于临床碱烧伤后角膜组织进行保护性治疗提供了理论依据。