条件培养基对昆虫细胞BTI-Tn5B1-4及克隆株特性的影响

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本论文对目前国际上广泛应用的BTI-Tn5B1-4细胞及其克隆株H5CL-B、H5CL-F分别进行了条件培养基的培养.比较了细胞在含条件培养基和不含条件培养基SF900Ⅲ无血清培养基中的生长速率、病毒产量和重组蛋白表达水平.主要结果如下:   1、细胞在两种培养基的生长曲线测定显示,BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在含条件培养基的Sf-900Ⅲ中生长速度快,群体倍增时间短,分别为25.5h、25.5h、21.9h,而在Sf-900Ⅲ中它们的群体倍增时间分别为30.3h、28.7h、24.2h。   2、用AcMNPV-1A病毒分别对两种培养基中的BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F细胞进行侵染。结果表明,细胞系在两种培养基的病毒感染率都在93%以上,多角体产量两种培养基间无明显差异。   3、重组蛋白β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)和碱性磷酸酶(secretedalkalinephosphatase,SEAP)的表达测定,结果表明,两种培养基间的β-半乳糖苷酶表达量无明显差异;细胞系BTI-Tn-5B1-4、H5CL-B和H5CL-F在CM中表达量高于在Sf-900Ⅲ的表达量,其中H5CL-F在CM中表达量最高(3.98×104IU/mL),大约比它在Sf-900Ⅲ的表达量提高10%。三种细胞系的碱性磷酸酶在CM中的表达量明显高于在Sf-900Ⅲ中的表达量,其中BTI-Tn-5B1-4在CM的表达水平最高达(8.62IU/mL),大约为H5CL-B、H5CL-F在Sf-900Ⅲ表达量的3-4倍。
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